Neuro2a (N2a) Células neurotumorais do cérebro do rato

Introdução das células

ClonaçãoO Neuro-2AÉ porR.J. Klebe (em inglês)eF.H. Ruddle (em inglês)EscrituraAEstabelecimento de tumores autónomos em ratos brancos. A célula produz grandes quantidades de microtubulina, que atua como um sistema de contração em resposta ao fluxo axioplasmico nas células nervosas.

Propriedades celulares

1）Fonte:Neuroblastoma cerebral

2）Formação：Células-tronco amíbicas

3）Conteúdo:>1x10⁶ Número de células

4）Especificações:T25garrafasou1mlEmbalagem de tubo de congelamento

5) Utilização:Apenas para uso científico.

Transporte e armazenamento:Gelo secotransportee recuperação para sobreviver.Células：（1）1mlEmbalagem tubo congelador transporte de gelo seco, após recepção-80Degrau conservado no frigorífico durante a noite após a transferência para o nitrogênio líquido ou recuperação direta,Se o gelo seco for limpo,cair a tampa da garrafa,Destruição e poluição celular, por favor, contacte-nos imediatamentecontato。（2）T25Sobrevivência da recuperação da garrafaCélulasEnvio a temperatura normal,ReceberDepois, siga o tratamento após a recepção das células.

Após a recepção das célulasTratamento:

1Depois de receber as células,75%Desinfectar a parede da garrafa com álcoolT25A garrafa é colocada37℃ Posicionamento da caixa de cultivo2-3hSe a garrafa de cultura for danificada, derramamento de líquido e poluição celular, entre em contato conosco imediatamente após tirar uma foto.

2(Por favor, aqui4ou5XConfirmar o estado da célula ao microscópio e fotografar as células recebidas (10×，20x) cada um2-3Uma fotografia da aparência da garrafa de cultivo é mantida como base para o estado da célula no momento da recepção pós-venda.

3）Células: Células em37℃ colocado na caixa de cultivo2-3hObservando o crescimento e a adesão das células sob o microscópio, algumas células adesivas podem cair devido à vibração durante o transporte rápido e se agrupar após a queda. Observando a densidade de crescimento das células60%Abaixo, o meio de irrigação pode ser removido da garrafa (se as células não pegadas precisarem de reciclagem centrífuga, ressuspenda na garrafa original),Adicionar meios dedicados para a nova formulação6-8 mlColoque em uma caixa de cultura celular para continuar a cultivar. Se a densidade das células crescer70%-80%Além disso, as células podem ser processadas. Durante a transmissão, as células que caíram devido à vibração de transporte precisam ser recuperadas por centrifugação.

4）Nota: o meio de cultura para transporte (meio de irrigação) não pode mais ser usado para cultivar células, por favor, substitua-o por um meio de cultura especializado recém-formulado de acordo com as condições de cultura celular do manual de instruções para cultivar células. Primeira sugestão de transmissão após recepção das célulasT25Cultivar garrafas1：2Geração

Um.Meio de CulturaeCultivoCongelaçãoCondições de preparação:

1）preparaçãoMEMmeios de cultivo;Qualidadesoro bovino,10%；Dupla resistência,1%。

2）Condições de cultivoGas: ar,95%o dióxido de carbono,5%Temperatura:37℃，A umidade do compartimento é70%-80%。

3）Liquido congelado：90%O soro，10% de DMSO，Atualmente em usoagoraequipamento。

Segundo.CélulasTratamento：

1）Recuperação de células congeladas：：

Vai conter1mlTubo de congelamento da suspensão celular37℃ banho de água agitar rapidamente para descongelar, adicionar a conter4-6mL para uso específicoO meio de cultura é misturado uniformemente no tubo centrífugo. Em1000 RPMCentrifugação sob condições3-5 minutosElimine o líquido superior e ressuspenda as células em meio de cultura dedicado. Em seguida, adicionar a suspensão celular6-8ml EspeciaisO meio de cultura em garrafas (ou pratos)37Cultivo durante a noite. No dia seguinte, o crescimento celular e a densidade celular foram observados sob o microscópio.

2）Transmissão celular:seCélulasDensidade até80%-90%，ou sejaPossívelCultivação。

Para a transmissão de células adherentes podem ser consultados os seguintes métodos:

1. Deixa-o fora.Cultivo limpo, sem cálcioÍons de magnésiodePBSLavar as células1-2Seguinte。

2. Inscrever0.25％（W / V(Panprotease)EDTA de 0,53 mMemna garrafa de cultivo（T25garrafas1-2ml，T75garrafas2-3 ml），Colocar em37℃Caixa de cultivoDigestão média1-2minuto(As células difíceis de digerir podem prolongar o tempo de digestão adequadamente)Mas...Depois, observado sob o microscópio.Digestão celularsituação,SeA maioria das células circulaE caiu.Recupere rapidamente a mesa de operação, toque.Alguns minutos.Depois do cultivo da garrafaInscrever3-4 mlcontém10%FBSO meio de cultivo vemTerminarDigestão。

3.Bater suavemente e aspirar.Em1000 RPMArtigoCentrífuga3-5 minutosEliminar o líquido, adicionar1-2mlSopre bem após a cultura.Pressione a suspensão celular.1：2proporção ao novoT25Na garrafa, adicione6-8 mlNovos meios dedicados configurados de acordo com os requisitos das instruções para manter o crescimento das células vitais, transmissão posterior de acordo com a situação real1:2~1:5proporção realizada。

3Congelação das células:Recomendação após a recepção das células antes da cultura3Congelar um lote de sementes celulares para uso experimental posterior. Por baixo.T25Exemplos de garrafas;

1. CélulasQuando congeladode acordo comO processo de transmissão celular coleta as células bem digeridas em um tubo centrífugo, que pode ser contado usando uma placa de contagem de células sanguíneas para determinar a densidade de congelamento das células. A densidade de congelamento recomendada para células gerais é1×10⁶~1×10⁷Uma célula viva./ ml.

2. 1000rpmCentrífuga3-5 minutosTire o alto. Suspender as células com líquido congelado preparado, pressionando cada1mlLiquido congelado contém1×10⁶~1×10⁷Uma célula viva.por mlDistribuir as células em um tubo de congelamento, marcando nomes, álgebras, datas e outras informações.

3. Coloque as células a congelar na caixa de refrigeração do programa,-80Passar a noite no frigorífico e depois transferir para um recipiente de nitrogênio líquido para armazenar. Registre também a localização do tubo de congelamento no recipiente de nitrogênio líquido para consulta e uso posterior.

Atenção:

1. Todas as células animais são consideradas potencialmente biológicamente perigosas e devem ser operadas dentro de um banco de biossegurança de nível secundário, com cuidado, todos os resíduos e utensílios que entraram em contato com a célula devem ser esterilizados antes de serem descartados.

2. É recomendado usar sempre luvas de proteção, roupas e máscaras de proteção durante a recuperação de células congeladas. Observação: O tubo de congelamento submerso em nitrogênio líquido vai vazar e vai lentamente encher o nitrogênio líquido. Quando descongelado, a fase de conversão de nitrogênio líquido em gás pode fazer com que o recipiente exploda ou sopra a tampa com força perigosa, gerando detritos volantes que causam danos pessoais.