Kit de culturas de órgãos (câncer de fígado, cólon, rim)

Uso

1, o original
(1) Os tecidos recolhidos devem ser colocados em garrafas de amostragem pré-refrigeradas (2-8 ° C) de conservação de tecidos E e rapidamente transportados para um laboratório limpo para tratamento de tecidos e separação celular, fotografia e registro de informações.
(2) Prepare vários pratos de petri e adicione o tampão de cultura original pré-refrigerado a 4 ° C como reposição.
(3) amostragem de garrafas de desinfecção, colocar o tecido em um prato de petri, depois de limpar três vezes usando o tampão de cultura original B, usar o jian ocular ou cirurgia dao para cortar o tecido jian em um volume de aproximadamente 1-3mm3blocos organizacionais.
(4) O tecido original do câncer de mama humano é digerido por digestão de C, 37 ° C e 10-20min de digestão por vibração, (observar a digestão em qualquer momento durante o processo de digestão).
(5) Depois de tomar uma pequena quantidade de líquido para observar sob o microscópio e observar sob o espelho mais células individuais ou agrupamentos de células abaixo de 70um, adicionar tampão de cultura original triplo do volume B para terminar a digestão.
(6) Usando uma tela de 100um de diámetro de orifício para filtrar, depois de coletar o filtro, depois de 5 minutos de centrifugação enriquecida de 300g, remova a limpeza superior e adicione o tampão de cultura original B para ressuspender a centrifugação.
(7) cálculo de cola de matriz: observar o volume de tecido coletado após a etapa 6, adicionando 25 vezes o volume de tecido de cola de matriz (abs9495(Repensar a placa.
(8) placa de cultura celular de 24 poços, por exemplo, a mistura de cola de matriz de tecido de 25ul por poço para a placa (operação a 4 ° C).
(9) Coloque a placa de cultivo pavimentada em uma caixa de cultivo de 37 ° C por 10-15 min para colar, adicionando o meio de cultivo de órgãos de câncer de mama humano A (restauração à temperatura ambiente) para a cultura.
2. Cultura de transmissão de órgãos
(1) Pistola de pipeta para aspirar o meio de cultura, adicionar 1-2ml de tampão de cultura de transmissão de órgãos de 4 ° C para cada orifício G colocar 2min.
(2) Pistola de pipeta suavemente soprar cola de matriz, recolher em tubo centrífugo de 15 ml, 4 ° C para 10min. (cada 6-8 buracos em um grupo)
(3) a: quando o número de organoides é insuficiente ou o volume é pequeno: centrifugar 5min para descartar a limpeza superior, adicionar a quantidade adequada de tampão de cultura de transmissão de organoides G re-suspensão para transferir para um tubo de centrifugação de 1,5ml, 300g centrifugar 5min para descartar o líquido para a etapa 4.
b: Quando o número de orgânicos é maior ou o volume é maior: centrifugar 5min para descartar a limpeza superior, adicionar a quantidade apropriada de orgânico de transmissão de líquido digestivo D para digerir 2-3min, adicionar o tampão de cultura de transmissão de orgânico G para terminar a digestão, centrifugar 5min para descartar a mistura, adicionar a quantidade apropriada de orgânico de transmissão de líquido digestivo G para deslocar em um tubo de centrifugação de 1,5ml, 300g de centrifugação 5min para descartar o líquido para a etapa 4.
(4) Depois da coleta de orgânicos, adicionar a cola de matriz em suspensão, cada poço de cola de matriz 25ul colocado em uma placa de cultura celular de 24 poços, colocar a caixa de cultura em 10-15min adicionar 500ul do meio de cultura de orgânicos de câncer de mama humano A.
3 - Congelação de órgãos
(1) Pistola de pipeta para aspirar o meio de cultura, adicionar 1-2ml de tampão de cultura de transmissão de órgãos de 4 ° C para cada orifício G colocar 2min.
(2) Pistola de pipeta suavemente soprar cola de matriz, recolher em tubo centrífugo de 15 ml, 4 ° C para 10min. (cada 6-8 buracos em um grupo)
(3) centrifugar 5min para descartar a limpeza, adicionar a quantidade adequada de tampão de cultura de transmissão orgânica G novamente, 300g centrifugar 5min para descartar o líquido.
(4) Adicionar uma quantidade moderada de congelador de órgãos F, suavemente soprar a ressuspensão, tomando uma placa de cultura celular de 24 poços como exemplo: congelar 1 tubo de densidade de 2 poços, com um volume de 1,4 ml por tubo.
(5) Faça a informação de marcação, depois de realizar o processo de resfriamento, para a conservação de longo prazo no nitrogênio líquido.
4 Recuperação de órgãos
(1) Tome 10 ml de tampão de cultura de transmissão orgânica G em um tubo centrífugo de 15 ml.
(2) Remova as células orgânicas congeladas do tanque de nitrogênio líquido e coloque-as rapidamente em uma panela de banho de água a 37 ° C para derreter.
(3) Durante o processo de derretimento do banho de água, é necessário agitar suavemente o tubo de congelamento para garantir que o líquido congelado se derreta em 1-2 minutos.
(4) Transferir rapidamente as células orgânicas dissolvidas para um tubo de centrifugação de 15 ml, soprar suavemente 6-8 vezes com um tubo de pipeta, centrifugar 300g por 5 minutos e, em seguida, remover o soro superior e coletar a precipitação de células orgânicas. Adicione a quantidade apropriada de tampão de cultura de transmissão orgânica G para deslocar em um tubo de centrifugação de 1,5 ml para centrifugação de 300g em 5min.
(5) cola de matriz resuspendida, cola de matriz de 25ul por poço colocado em uma placa de cultura celular de 24 poços, colocado em uma caixa de cultura de 10-15min para cola, adicionando 500ul médio de cultura de órgãos de câncer de mama humano A.