Marca de anticorpos de proteína lipídica 2

Detalhes:

Nome em inglês:do PLP2

Alios em Inglês:A4; Proteína dependente da diferenciação A4; A4-LSB; A4LSB; proteína A4 dependente da diferenciação; Proteína A4 dependente da diferenciação; Proteína A4 da membrana intestinal; MGC126187; PLP2; PLP2_HUMAN; Proteolípido2 (colonicepithélio enriquecido); Proteolípido2.

Reação cruzadaHumano, Rato, Rato, Porco, Cavalo, Coelho

Marcação: Não conjugado

Fonte de anticorpos: Coelho

Tipo de anticorpo: Policlonal

Imunogênio: KLH conjugado sintético peptido derivado do humano PLP2

Localização de proteínasMembrana celular:

Método de purificação:afinidade purificada por ProteinA

Subtipo: IgG

Características: líquido

concentração: 1mg / ml

Liquido de armazenamento0,01 MTBS (pH7,4) com 1% BSA, 0,03% Proclin300 e 50% Glicerol.

Salvar Condições: Shippedat4 ℃. Armazenar-20°C por ano. Evite ciclos de congelamento/descongelamento repetidos.
Os produtos da empresa são usados apenas para pesquisa científica

Processo de preparação de anticorpos:

1. Materiais e Reagentes

Ig animal extraído

b. Agentes de Furniture e Agentes de Furniture

Animais de Experimento Coelho

e) Outros materiais e reagentes

2- Escolha o corpo experimental.

Realizar experimentos imunológicos em animais.

Experimente amostras de sangue para verificar o efeito imunológico.

Se a imunização for bem sucedida, matar o organismo experimental e coletar todo o soro.

6 Purificar os anticorpos.

7 Identificação de anticorpos. Soro fetal bovino (estéril)
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Passos de operação:

1. hidratação de cera. Coloque as fatias de parafina em uma desnatação de ditafenilo fresco durante 15 minutos e repita três vezes. Depois de remover o excesso de líquido, coloque-o em etanol sem água, etanol a 95%, etanol a 90%, etanol a 80% e etanol a 70%, cada um por 5 minutos e enxague com água destilada (ou água da torneira) por 5 minutos. Lave as fatias com tampão PBS (reagente 1, dissolve o pó seco em 1 L de água deionizada) durante 5 minutos e repita três vezes.

Reparação de antígenos. Coloque a corte de tecido após a hidratação descerada no prato de corte de plástico resistente a altas temperaturas no copo (ou caixa de reparação), adicione a quantidade adequada de líquido de reparação 1 x líquido de reparação de antígeno de citrato de sódio (reagente 2, dilua o líquido de reparação de antígeno de citrato de sódio 100 x com água deionizada em 1 x líquido de reparação de antígeno de citrato de sódio), a superfície do líquido deve ser mergulhada em uma certa altura do tecido da corte, coloque a caixa de reparação em água fervente e ferva a reparação por 15 minutos depois de retirar o slide, refrigerando naturalmente à temperatura ambiente. Lave as fatias com tampão PBS durante 5 minutos e repita três vezes.

AtençãoQuando se repara o antígeno, é importante que o líquido de reparação certifique-se de que as fatias estão sempre mergulhadas no líquido, a condição geral: a quantidade de líquido de reparação é de cerca de 800 mL / 1 rack.
Bloquear a peroxidase endógena. Limpe a lâmina com papel de absorção de água, pinte a caneta imunocompositória ao redor do tecido, acrescente gota a gota 50 μL de bloqueador de peroxidase endógena (reagente 3) no tecido de corte para bloquear a peroxidase endógena, incube a temperatura ambiente por 30 minutos, enxague a corte com tampão PBS por 5 minutos e repita três vezes.

Sero fechado. Limpe a lâmina seca com papel de absorção de água, gotejar e adicionar 50 μL de líquido de trabalho normal de soro de cabra (reagente 5), fechado a 37 ° C por 20 minutos para reduzir a não

coloração específica.

5. resistência à incubação. Diluir um antígeno em líquido de trabalho com um diluído de anticorpos (reagente 4), limpar o líquido ao redor do tecido da lâmina com papel absorvente de água, adicionar gota a gota a quantidade apropriada de líquido de trabalho de anticorpos, colocar em uma caixa úmida para incubar a noite a 4 ° C ou incubar a 37 ° C por 1h-2h.

6. Recuperação. Extrair a amostra do frigorífico após uma noite de 4 ° C e incubar a temperatura ambiente para 15 minutos de reaquecimento (a incubação de anticorpos para uma noite de 4 ° C escolher esta etapa, por exemplo, incubação a temperatura ambiente diretamente para a próxima etapa de limpeza). Lave as fatias com tampão PBS durante 5 minutos e repita três vezes.

2. incubação. Papel de absorção de água esfregar seco corte depois de adicionar gota a gota 50 μL marcado de ovelha anti-coelho IgG (Reagente 6), incubar a 37 ° C por 20 minutos com PBS

Limpeza de tampão5 minutos e repetir três vezes.

8.3 Incubação. Depois de limpar as fatias secas com papel de absorção de água, adicionar gota a gota 50 μL de incubação de proteína de catenase marcada por morganase (reagente 7), incubar a 37 ° C por 20 minutos, lavar as fatias com tampão PBS por 5 minutos e repetir três vezes.

9. exibição. Elimine o tampão PBS e limpe as fatias do papel de absorção de água; Cada gota de corte adiciona 50μL de líquido de trabalho DAB recém-preparado (configuração de proporção Reagente 8: Reagente 9: Reagente 1 = 1: 1: 18), incubar 3-5min, observar os resultados de coloração sob um microscópio óptico e nunca mostrar cor muito profunda; Enxague as fatias com água da torneira após a coloração para terminar a coloração.

10. reinfecção. Coloque gota a gota uma quantidade moderada de tintura de sumucina (reagente 10) para re-infectar, incubar por 1-5 minutos, lavar com água da torneira por 5 minutos e diferenciar o álcool gota a gota

Liquidificação30 segundos, lavar com água.

11. Desidratação. Coloque o slide em 70% de etanol, 80% de etanol, 90% de etanol, 95% de etanol e etanol sem água por 5 minutos cada, depois coloque o slide em ditafenilo por 15 minutos e repita três vezes. As lâminas são retiradas para secar um pouco e seladas com cola neutra.

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