Kit de ELISA de Melatonina (MT) em Rato

Kit de ELISA de Melatonina (MT) em Rato

lEste kit é usado para testes quantitativos in vitroAmostras de soro, plasma, homoplasma de tecidos e líquidos relacionadosmeioMelatonina em ratos（MT(Conteúdo).

lDuração: 6 meses

lCondições de conservação:2-8℃

lEste kit é destinado apenas à pesquisa científica e não deve ser usado para diagnóstico clínico.

Princípios experimentais

Os kits são usados ​​com um teste de imunoassorção ligado a centrifase de dois anticorpos em um passo (ELISA). O pacote de anticorpos capturados por melatonina (MT) em ratos foi pré-embalado em microporos, adicionando amostras, produtos padrão, anticorpos de detecção marcados por HRP, após cultivo térmico e lavagem. Colorado com o substrato TMB, o TMB é convertido em azul sob a catálise da peroxidase e em amarelo final sob a ação do ácido. A clareza da cor foi positivamente correlacionada com a melatonina (MT) em ratos na amostra. Calcule a concentração da amostra medindo a absorção (OD) a um comprimento de onda de 450 nm com um calibrador enzimático.

Processamento de amostras e requisitos

1. O soro：As amostras de sangue inteiro coletadas em um tubo de separação de soro são colocadas a temperatura ambiente durante 2 horas ou 4 ° C durante a noite e, em seguida, são centrifugadas por 1000 x g por 20 minutos para retirar a limpeza ou manter a limpeza superior a -20 ° C ou -80 ° C, mas deve ser evitado congelamento repetido.
2. Plasma sanguíneo：Recolha a amostra com EDTA ou hepatina como anticoagulante e centrifuge a amostra em 2-8 ° C 1000 x g por 15 minutos dentro de 30 minutos após a coleta, para detectar a limpeza ou manter a limpeza superior a -20 ° C ou -80 ° C, mas deve ser evitado congelamento repetido.
3. Organização homogênea:Enxague o tecido com PBS pré-refrigerado (0,01 M, pH = 7,4), remova o sangue residual (os glóbulos vermelhos fissados no homoplasma podem afetar os resultados da medição) e despesa o tecido após a pesagem. O tecido cortado com o volume correspondente de PBS (geralmente em uma relação de peso a volume de 1: 9, por exemplo, 1 g de amostra de tecido corresponde a 9 ml de PBS, o volume específico pode ser ajustado adequadamente de acordo com as necessidades experimentais e registrado. Recomenda-se a adição de inibidores de protease em PBS) para adicionar ao amortiguador de vidro e moer completamente no gelo. Para separar ainda mais as células do tecido, o molho homogêneo pode ser quebrado por ultra-som ou congelado repetidamente. Depois, a solução será homogeneizada em 5000 x g por centrifugação por 5 a 10 minutos e removida para a detecção de limpeza.

Culturas celulares ou outras amostras biológicas:Por favor, centrifuge 1000 x g por 20 minutos para que a limpeza seja detectada ou mantenha a limpeza superior a -20 ° C ou -80 ° C, mas deve ser evitado o congelamento repetido.

Nota: A hemolisise da amostra pode afetar os resultados do teste pós, portanto, a hemolisise da amostra não é recomendada para este teste.

Reagentes e equipamentos necessários e não fornecidos

• Calibrador enzimático (450 nm)

• Amostradores de alta precisão: 0,5-10uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL

• 37 ° C termostato

• Água destilada ou desionizada

Composição do Kit

Kit de ELISA de Melatonina (MT) em RatoPreparaçãoNota：

As concentrações padrão são: 80, 40, 20, 10, 5, 2,5 pg/mL

Após um grande número de testes de amostras normais, os valores de concentração normal da amostra estão dentro da faixa de teste fornecida pela caixa de ensaio, e a amostra de 50 μL pode ser tomada diretamente durante o processo experimental. Quando um valor parcial da amostra exceder a concentração padrão de zui, a amostra é diluída adequadamente com um diluído de amostra disponível para o experimento.

Precauções

• Criação térmica de acordo com o horário e a temperatura especificados para garantir resultados precisos. Todos os reagentes devem atingir a temperatura ambiente de 20-25 ° C antes de serem usados. Mantenha o reagente refrigerado imediatamente após a utilização.

• Lavar a placa incorretamente pode levar a resultados imprecisos. Assegure-se de absorver o máximo líquido dentro do orifício antes de adicionar o substrato. Não deixe os microporos secar durante o processo de aquecimento.

• Elimine líquidos e impressões digitais que permanecem no fundo da placa, caso contrário, afete o valor de OD.

• O líquido de coloração de substância deve ser incolor ou de cor muito clara, o líquido de substância que se tornou azul não pode ser usado.

• Evite a contaminação cruzada de reagentes e amostras para evitar resultados errados.

• Evite a exposição direta à luz intensa durante o armazenamento e a criação térmica.

• Depois de equilibrar até a temperatura ambiente, abra o saco de vedação para que as gotas impermeáveis ​​se condensem na placa fria.

• Nenhum reagente de reação pode entrar em contato com o solvente de branqueamento ou os gases fortes emitidos pelo solvente de branqueamento. Qualquer componente de branqueamento pode interromper a atividade biológica do reagente de reação no kit.

• Não é possível usar produtos expirados.

• Se a transmissão da doença for possível, todas as amostras devem ser bem administradas e as amostras e os dispositivos de teste devem ser tratados de acordo com os procedimentos prescritos.

Preparação do Reagente

O kit deve ser retirado do ambiente refrigerado antes de ser usado após o equilíbrio de temperatura ambiente.

20 x diluição do tampão de lavagem: a água destilada é diluída em 1: 20, ou seja, 1 porção de tampão de lavagem 20 x mais 19 porções de água destilada.

Passos de operação

1. Remova a placa necessária do saco de folha de alumínio após o equilíbrio de temperatura ambiente de 20min, e a placa restante é colocada de volta a 4 ° C com um saco autoselado.

2. Estabeleça um orifício padrão e um orifício de amostra, cada orifício padrão adicionando uma concentração diferente de 50 μL de produto padrão;

3. Adicionar 50 μL de amostra a ser testada no orifício da amostra; Nenhum buraco em branco.

4. Além dos buracos em branco, os buracos padrão e os buracos da amostra adicionam 100 μL de anticorpos de detecção marcados por peroxidase de raiz (HRP) a cada buraco, selam o buraco de reação com uma membrana de vedação, aquecem uma panela de banho de água a 37 ° C ou uma caixa termostática por 60 minutos.

5. Eliminar o líquido, secar no papel de absorção de água, encher cada buraco com líquido de lavagem (350 μL), deixar em reposição por 1 min, descartar o líquido de lavagem, secar no papel de absorção de água, assim repetir a placa 5 vezes (também pode ser lavada com uma máquina de lavar placas).

6. Adicione 50 μL de substâncias A e B a cada poço e incube a luz a 37 ° C por 15 min.

7. Adicione 50 μL de líquido terminal a cada orifício e, dentro de 15 minutos, determine o valor de OD de cada orifício a um comprimento de onda de 450 nm.

Cálculo de resultados experimentais

Usando o valor de OD do produto padrão medido como coordenada horizontal, o valor de concentração do produto padrão como coordenada longitudinal, desenhe a curva padrão no papel de coordenadas ou com o software relevante e obtenha a equação de regressão linear, substitua o valor de OD da amostra pela equação para calcular a concentração da amostra.

Desempenho da caixa

• Intervalo de detecção: 2,5 pg/mL – 80 pg/mL.

• Sensibilidade: baixa concentração de detecção inferior a 0,1 pg/mL.

• Especificação: não se cruza com outros análogos estruturais solúveis.

• Repetibilidade: o fator de variação dentro da placa é menor de 10% e o fator de variação entre placas é menor de 15%.

explicação

Como as condições existentes e o nível científico e técnico ainda não permitem a identificação e análise completa de todas as matérias-primas fornecidas por todos os fornecedores, este produto pode apresentar certos riscos técnicos de qualidade.

• Os resultados finais do experimento estão intimamente relacionados com a eficácia do reagente, as operações relevantes do experimentador e o ambiente experimental no momento, por favor, certifique-se de ter uma cópia de segurança adequada da amostra.

• Diferentes lotes do mesmo produto podem ter pequenas diferenças, tais como limites de detecção, sensibilidade e tempo de exibição de cor, por favor, faça o experimento de acordo com as instruções da caixa, as instruções eletrônicas do site são apenas para referência.

• Somente o uso completo do reagente que acompanha este kit pode garantir o efeito do teste e não pode ser misturado com produtos de outros fabricantes. Os resultados* só serão obtidos se as instruções experimentais deste kit forem rigorosamente seguidas.

• A empresa é apenas responsável pelo próprio kit, não é responsável pelo consumo de amostras causado pelo uso deste kit, por favor, o usuário deve considerar plenamente a quantidade de uso possível da amostra antes de usar e reservar amostras suficientes.

• A homologação de tecidos ou extração celular preparada com fissos químicos pode levar a desvios nos resultados do ELISA devido à introdução de certos produtos químicos.

• Se a amostra for limpa para a cultura celular, pode haver circunstâncias indetectáveis devido a muitos fatores de interferência na amostra, como o estado celular, o número de células, o tempo de amostragem, etc.

• Algumas proteínas naturais ou recombinantes, incluindo recombinantes protonucleares e eunucléares, podem não ser detectadas porque não correspondem aos anticorpos de detecção e captura usados neste produto.