Kit de teste de ácido nucleico para o vírus da farinha ovina (ORFV)

[Nome do produto]Vírus da ferida ovina (ORFVKit de teste de ácido nucleico

[Especificações da embalagem]50T / caixa

[Método de Produto]Fluorescença em tempo realLei PCR

Vírus da ferida ovina (ORFVKit de teste de ácido nucleico

Reação RT-PCR, misturase, controle positivo, controle negativo.

[Condições de armazenamento e prazo de validade]

Proteção da luzConservar abaixo de -20 ° C para evitar o congelamento repetido, com validade de 12 meses.

[Instrumentos aplicáveis]
Série ABI, Série Bio-Rad, Série Agilent Stratagene MX, Roche LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, Série Rotor-Gene, Série Hangzhou Bogie e outros PCR quantitativo de fluorescência multicanal em tempo real.

[Método de teste]

Preparação do Reagente (Área de Preparação do Reagente)

（1) Tire o kit do frigorífico, remova o reagente necessário para o experimento do kit, derreta completamente e misture e centrifuge instantaneamente para remover o líquido ligado à parede do tubo.

（Contabilizar o número de reações necessárias para o experimento (n) e calcular as doses necessárias para o experimento de acordo com o sistema de reações mostrado na tabela abaixo.

n = número de controles negativos (1T) + número de controles positivos (1T) + retenção de erro (1T) + número de amostras

（3) Adicione o reagente acima em um tubo de centrifugação estéril e centrifuge instantaneamente após misturar completamente. O reagente é dividido no tubo de reação de PCR em uma quantidade de 20 μL/tubo.

（4) Transferir o tubo de reação de PCR para a área de tratamento da amostra após tapar a tampa da reação de PCR. O reagente restante é colocado de volta para congelação no frigorífico abaixo de -20 ℃.

Preparação da amostra (área de processamento da amostra)

UsarQIAGEN, Roche DNA ququKit para DNA ququKit, operação específica de acordo com suas instruções de kit.

3. Adição de amostras

Preparados acimaAdicione 5 μl de DNA da amostra tratada e 25 μl de volume final no tubo de amostra de reação de PCR, misture a tampa de reação de PCR e centrifuge instantaneamente a baixa velocidade para transferir para o instrumento de PCR. O controle negativo e o controle positivo são adicionados com o controle negativo ou o controle positivo fornecido com a caixa de 5 μL, com um volume final de 25 μL / tubo, depois de misturar a tampa de reação de PCR com uma centrifugação instantânea de baixa velocidade e transferir para o instrumento de PCR.

PCR (área de amplificação de PCR)

（1) Tome o tubo de reação de PCR preparado para a área de tratamento da amostra, coloque-o na posição correspondente no compartimento de amostra do PCR quantitativo de fluorescência em tempo real e registre a ordem de colocação.

（2) Defina os parâmetros relacionados à amplificação de ácido nucleico do instrumento para amplificação de PCR na tabela abaixo.

Nota:A série ABI de PCR fluorescente não seleciona a correção ROX no momento da configuração, configurando o grupo de extinção selecionando Nenhum.

[Valor de referência (âmbito de referência)]

Determinação da eficácia do kit:

（1) Controle positivo: curva típica de amplificação tipo S ou valor de Ct ≤35.

（2) Controle negativo: valor de Ct > 38 ou nenhum valor de Ct, a linha é reta ou ligeiramente inclinada, sem período de crescimento exponencial.

Os resultados da amostra determinam:

（1) Positivo: os resultados do teste da amostra têm um valor de Ct ≤ 35 ou um período de crescimento exponencial evidente.

（2) Duvidoso: os resultados do teste da amostra têm um valor de Ct entre 35 e 38. Neste momento, a amostra deve ser testada repetidamente, se o resultado do experimento repetido ainda estiver no intervalo de 35 a 38, com um período de crescimento exponencial evidente, será considerado positivo ou negativo.

（Negativo: o resultado do teste da amostra é Ct > 38 ou nenhum valor de Ct.

[Limitações do método de teste]

Quando a concentração de ácido nucleico em amostras de teste é inferior a maisDetecção di limite dhis pode ocorrer resultados falsos negativos.

Este kit é usado apenas para triagem preliminar de espécimes e os resultados positivos do teste deste kit devem ser confirmados por meio de métodos de cultura.

[Atenção]

Os laboratórios que usam este kit devem ser administrados de acordo com as normas de gestão de laboratórios de teste de amplificação genética relevantes promulgadas pelas partes relevantes do país;

Para evitarA degradação do RNA, o processo de processamento da amostra deve ser operado em condições de 0-4 ° C, e imediatamente após a conclusão do experimento para a detecção; Os materiais consumíveis dos aparelhos utilizados durante o processamento das amostras devem ser tratados sem nuclease;

Todos os artigos regionais são exclusivos e não devem ser usados ​​cruzadamente para evitar a poluição; Após o teste, a mesa de trabalho deve ser limpa imediatamente;

Ao absorver o líquido de reação, deve-se tentar evitar a geração de bolhas; cimaAntes da PCR, deve-se verificar se os tubos de reação estão fechados para evitar que a evaporação do líquido cause resultados imprecisos;

Todos os reagentes do kit devem ser completamente fundidos e misturados a temperatura normal antes de serem usados e devem ser instantaneamente centrifugados;

Todos os controles negativos e positivos no kit devem ser transferidos para a área de preparação do espécime e armazenados separadamente antes da primeira utilização;

Para evitar interferências fluorescentes, o contato direto com as mãos nuas deve ser evitado.tubo de reação de PCR e deve evitar qualquer marcação no tubo de reação de PCR;

A cabeça de aspiração usada durante o processo de detecção deve ser atingida diretamenteDentro do cilindro de resíduos de 10% de ácido hipoclorado, o tubo de reação de PCR terminado de detecção, cheque a tampa aberta e descartado após a esterilização junto com outros resíduos; Mesas de trabalho e vários equipamentos de laboratório devem ser desinfetados regularmente com 10% de ácido hipoclorado, 75% de álcool ou luz ultravioleta;

Os parâmetros relacionados à amplificação do instrumento devem ser definidos de acordo com os requisitos relevantes desta instrução; Reagentes diferentes não podem ser misturados; e utilização durante o período de validade.