Kit de teste de pH celular (fluorescência azul) Usando precauções 1. O reagente do tubo de microreagente da tampa de espiral deve ser centrifugado brevemente antes de abrir a tampa, recolhendo o líquido na parede interna da tampa para o fundo do tubo para evitar derramamento de líquido ao abrir a tampa. Antes de usar, retire o produto de temperatura ambiente e centrifuge-o brevemente para concentrar a solução de DMSO no fundo do tubo. A sonda de pH é uma solução de DMSO, quando a temperatura do inverno é baixa, a temperatura ambiente é condensada e é extremamente fácil de aderir à parede do tubo e à parede da cabeça. Atenção à necessidade de aquecimento e dissolução, a cabeça de aspiração também precisa ser colocada no recipiente de pré-aquecimento, caso contrário, é fácil coagular novamente na parede interna da cabeça de aspiração para gerar perdas.
Kit de teste de pH celular
Temperatura de conservação: 2-8 ° C
Precauções
Kit de teste de pH celular (fluorescência azul) não pode ser mantido a -20 ° C a longo prazo. Evite o congelamento repetido.
A sonda A é uma solução de DMSO, a temperatura de inverno é baixa no estado de coagulação, muito fácil de aderir à parede do tubo e à parede da cabeça. Observe a necessidade de aquecer e derreter, tornando-se líquido depois de centrifugar até o fundo do tubo e abrir a tampa.
Duração: 6 meses
Método de teste: citométria de fluxo / / confocação a laser / microscópio fluorescente
Amostra aplicável: células
Aplicação do produto: citométrio de fluxo / / confocação a laser / microscópio fluorescente
Preparação do instrumento
1. citométria de fluxo ou microscópio de confocação ou fluorescência a laser
2. Centrífugas
3. Pipeta
4. Frigorífico
5. caixa de gelo
Preparação do Reagente
1.PBS tampão 2.HBSS 3. (opcional) Nigericina sal de sódio (相关产品BB-94002)
Preparação de Consumíveis
1. Tubo centrífugo
2. Sucção da cabeça
3. Luvas de uso único
Precauções para o uso do kit de teste de pH de células lisosomáticas (fluorescência azul)
1. o tubo do reagente da tampa em espiral antes de abrir a tampa, centrifuge brevemente, colete o líquido na parede interna da tampa para o fundo do tubo, para evitar que o líquido caia quando a tampa for aberta. Antes de usar, retire o produto de temperatura ambiente e centrifuge-o brevemente para concentrar a solução de DMSO no fundo do tubo.
A sonda de pH é uma solução de DMSO, quando a temperatura do inverno é baixa, a temperatura ambiente é condensada e é extremamente fácil de aderir à parede do tubo e à parede da cabeça. Atenção à necessidade de aquecimento e dissolução, a cabeça de aspiração também precisa ser colocada no recipiente de pré-aquecimento, caso contrário, é fácil coagular novamente na parede interna da cabeça de aspiração para gerar perdas.
O kit de teste de pH celular detecta o pH dentro da célula usando um indicador de pH ou uma sonda de indução de pH. Geralmente existem os seguintes métodos::
Método de sonda fluorescente:
Alguns kits de pH celular usam sondas de indução de pH marcadas por fluorescência que podem se ligar a íons de hidrogênio (H+) dentro da célula. A intensidade da fluorescência da sonda varia de acordo com a mudança do pH. Medindo as mudanças na fluorescência, o pH dentro da célula pode ser calculado.
Por exemplo, as sondas fluorescentes comumente usadas são SNARF-1 e BCECF, que variam em intensidade de fluorescência e comprimentos de onda de emissão em ambientes de pH diferentes para análise com dispositivos como microscópios confocais a laser ou espectrofotômetros de fluorescência.
Indicadores de pH:
Outra abordagem comum é usar indicadores de pH que mudam de cor a diferentes pH. Este método é geralmente usado para observação sob microscópio ou em combinação com a citometria de fluxo. Por exemplo, indicadores de pH como o fenol vermelho podem apresentar cores diferentes na cultura celular à medida que o pH muda.
Método de citologia de fluxo (FACS):
Medir o pH de células individuais usando a citologia de fluxo em combinação com sondas fluorescentes. Este método permite realizar um teste de pH de alto fluxo em uma população celular.
Metodologia de potencial:
A Lei do Potencial usa eletrodos de pH ou eletrodos seletivos de íons (ISE) para medir diretamente as mudanças de potencial dentro da célula para calcular o pH.
Perguntas frequentes:
Q1: Qual é o princípio comumente usado para a detecção de pH celular?
A1: Usa principalmente sondas fluorescentes sensíveis ao pH. A intensidade de fluorescência ou o comprimento de onda de emissão dessas sondas variam em diferentes graus de acidez e alcalinidade, refletindo com precisão o pH dentro dos órgãos celulares (como o lisosoma) ou a citoplasma.
Q2: Por que é necessário testar o pH das células?
A2: O pH intracelular é um parâmetro fisiológico essencial que afeta a atividade enzimática, proliferação celular, ingestão intracelular, apoptose e outras atividades vitais. Anomalias de pH estão intimamente relacionadas a processos patológicos como tumores e doenças neurodegenerativas.
Q3: Quais são as aplicações comuns do kit de teste de pH celular?
A3: Amplamente utilizado para estudar a autofagia celular (monitoramento da acidificação dos autofagos), o metabolismo das células tumorais (efeito Wabberg), as mudanças de pH durante a ingestão intracelular mediada pelo receptor e o efeito da droga no ambiente intracelular.
Q4: Quais são as principais precauções ao detectar o pH da célula?
A4: Os pontos-chave incluem: garantir a precisão das curvas de calibração, evitar a extinção da sonda, manter a estabilidade do ambiente de cultivo (por exemplo, a concentração de CO2) durante o processo de teste e definir grupos de controle positivos e negativos razoáveis para garantir a confiabilidade dos resultados.
Q5: Como escolher a sonda de detecção de pH celular adequada?
A5: A sonda específica deve ser selecionada de acordo com o órgão alvo (por exemplo, citoplasma, lisosoma) e a sonda com o comprimento de onda de excitação/emissão adequado deve ser selecionada de acordo com a configuração do laser e do filtro do equipamento experimental (por exemplo, microscópio fluorescente, citométrio de fluxo).