Transfectação de células ósseas humanas SV40 HFOB1.19 (STR)

Transfectação de células ósseas humanas SV40 HFOB1.19 (STR)Condições de cultivo

Dois.Tratamento após a recepção

Tratamento de células de recuperação:Encher o líquido de cultura e fechar a boca da garrafa após o cultivo em bom estado é a melhor maneira de transportar as células. As células recebidas são pulverizadas com 75% de álcoolgarrafas de células,Estritamente estérilDepoisColoque as garrafas de células no recipiente por 2-4 horas para estabilizar o estado das células.. O microscópio pós-reposição observa o crescimento celular e realiza diferentes fotografias múltiplas das células para a conservação (preferivelmente 40x, 100x, 200x cada foto), os primeiros três dias de fotografia são uma base pós-venda importante, não fornecer imagens em bom estado de recepção padrão.

Tratamento de células congeladas:Depois de receber as células, observe se há gelo seco em caixa de espuma, se o tubo de congelamento está intacto ou não, se houver descongelamento, se encontrar vaporização de gelo seco ou descongelamento do tubo tem dano descongelado, por favor tire fotos e entre em contato conosco. Se a célula não entrar em contato conosco dentro de três dias da assinatura, o recebimento é considerado bom por padrão. Recuperação do primeiro tubo Se houver problemas de atividade, por favor, entre em contato conosco prontamente, o técnico comunicar-se com você para instruir depois de recuperar o segundo tubo,Não entrar em contato conosco para recuperar o segundo tubo não autorizado após o problema.

Passos de cultura celular

a eTransmissão celularSe:Quando a convergência não excede 80%, colete a cultura engarrafada em um tubo centrífugo, deixe 5 ml de meio de cultura e coloque em 37 ° C, 5% CO₂incubação; Se a densidade celular for superior a 80%, a cultura de transmissão pode ser realizada.

Células de paredeOs passos são os seguintes:

1) Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio;

2) Adicione 1 ml de líquido digestivo (0,25% Trypsin-0,53 mM EDTA) em uma garrafa de cultura, coloque a caixa de cultura para digerir 1 min, em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e cair, rapidamente recuperar a mesa de operação, depois de bater alguns toques na garrafa de cultura, adicione 6 ml contendo soro de 10%.Meio de Culturaterminar a digestão;

3) Soprar suavemente as células, após a queda, aspirar para o tubo de centrifugação, 1000 rpm centrifugar 5-8min, descartar o líquido de limpeza superior, adicionar 1-2mL de meio de cultura depois de soprar bem;

4) A suspensão celular é dividida em uma proporção de 1: 2 em um novo prato de Petri de 6 cm contendo 5-6 mL de meio por garrafa, adicionando 5-6 mL de meio ou garrafa T25.

(ou seja, 1 garrafa T25 é transferida para 2 garrafas T25 ou 2 pratos de Petri de 6 cm)

Células suspensasAs etapas de transmissão são as seguintes:

1- Método de semi-troca de líquido

Tratamento de semi-troca de líquido, colocar a garrafa em posição no recipiente por cerca de 1 hora, suavemente absorver cerca de 3 ml de meio de cultura, em seguida, a reposição de 3 ml de meio de cultura, se o meio de cultura mudar de cor lenta, pode adicionar diretamente cerca de 500 ul de FBS, a transmissão pode ser submetida diretamente a 5 ml de meio de cultura em duas culturas de garrafas, geralmente, a transmissão de cerca de 3 vezes pode ser transmitida por centrifugação uma vez, removendo as células mortas.

2. Método de troca de líquido centrífugo

Se necessário, a garrafa pode coletar a suspensão celular em um tubo de centrifugação de 1000 rpm, centrifugar 5min, descartar a limpeza superior, adicionar 1-2mL de cultura depois de ressuspender e misturar a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 para a nova garrafa T25, adicionar 6-8ml de acordo com as instruções do novo meio de cultura configurado para manter a vitalidade do crescimento das células, a transmissão posterior é realizada de acordo com as circunstâncias reais na proporção de 1: 2 ~ 1: 5.

b eCongelação celular:

Quando as células crescem até cobrir 80% da área da garrafa de cultura, descarte o líquido de cultura na garrafa de cultura T25 e limpe as células uma vez com PBS;

2, adicionar 0,25% de líquido digestivo cerca de 1 ml para a garrafa de cultura, observar sob o microscópio invertido, até que as células retornem ao redor para adicionar 5 ml de líquido digestivo para terminar a digestão, em seguida, soprar suavemente as células para que caiam, em seguida, transferir a suspensão para o tubo de centrifugação de 15 ml, centrifugação de 1000 rpm em 5 minutos;

3, descartar o soro superior, as células precipitadas adicionar 1 ml de Yagi Bio-soro congelado (número de mercadoria: C7001), misturado e adicionado ao tubo de congelamento.

4, as células congeladas podem ser colocadas diretamente no frigorífico de -80 ° C, se as células forem transferidas para o tanque de nitrogênio líquido mais tarde,Requer geladeira a -80°CmédioArmazenamento por mais de 24 horasDepois, coloque no tanque de nitrogênio líquido.

C eRecuperação celular:

1, retirar o tubo de congelamento celular do nitrogênio líquido (cuidado com a proteção de uso)Máscara), coloque-a rapidamente. descongelar no banho de água de 37 ° C até que não haja cristalização no tubo de congelamento e, em seguida, limpar a parede externa do tubo de congelamento com 75% de álcool;

2、Mover as células do tubo de congelamento para o conteúdo 5ml de meio em tubo de centrífuga de 15ml, 1000rpm centrífuga 5min;

3、Eliminar o soro, precipitar com 5 ml de meio de cultura, vacinarPara a garrafa de cultivo T25, coloqueA 37°C, 5% CO₂culturas em caixas de cultura celular;

No dia seguinte, substitua o meio fresco para continuar a cultivar.

Atenção:Algumas células estão mal ligadas e são propensas a perder células durante o transporte, o que é normal. Se a separação mais pode coletar toda a cultura da garrafa para o tubo de centrifugação, 1000rpm centrifugação 5min,Coleta de alta clarezaCultura de transição(cultivo comparativo posterior)Depois de adicionar 1-2 ml de precipitação, soprar suavemente, ressuspender e digerir por 1-2 minutos, adicionar 5 ml de meio para terminar a reação. Centrifugar novamente, descartar a limpeza e adicionar 1-2ml de meio de cultura em suspensão. Em seguida, a transmissão em garrafas em proporção 1: 2 (dois T25), adicionando o novo meio para 5-8ml / garrafa e finalmente colocando37 ℃, 5% CO₂Cultura em uma caixa de cultura celular.

Novos e antigos clientes são bem-vindos a consultar:Transfectação de células ósseas humanas SV40 HFOB1.19 (STR)