U-Blot® Filme de impressão NC (0,2 μm)

U-Blot ® Filme de impressão NC (0,2 μm)

U-Blot ® A membrana de impressão de nitrato de celulose (NC) é uma membrana de microporosidade de nitrato de celulose pura e sem suporte para transferir proteínas e ácidos nucleicos de uma variedade de matrizes de gel.

Esta membrana de impressão de transferência tem dois diámetros: 0,2 μm e 0,45 μm, para combinar substâncias de vários pesos moleculares:

• Apertura de 0,45 μm: adequado para a maioria das amostras de proteína e oferece maior sensibilidade de detecção.

• 0,2 μm de diámetro: adequado para proteínas com peso molecular inferior a 20.000 para melhor absorção e retenção de proteínas pequenas.

U-Blot ® A resistência ao alongamento da membrana de impressão de celulose nitrata (NC) torna-a menos propensa a rasgar e rachar em comparação com outras marcas de membranas NC, que têm uma maior capacidade de ligação a proteínas e ácidos nucleicos, tornando-a mais adequada para a detecção de imunidade e ácidos nucleicos.

Separe a amostra de proteína e o marcador de proteína com o gel SDS PAGE.

Corte e coloque o gel cuidadosamente e equilibre o gel em tampão de transferência fria por 5 a 20 minutos.

Corte a película e o papel de filtro para o tamanho adequado ao gel. A membrana PVDF é pré-molhada em metanol por 20 segundos até que a sua cor branca opaca se torne uniformemente cinzenta e, em seguida, mergulhe em água ultrapura por 1-2 minutos para remover os resíduos do reagente; Em seguida, equilibre no tampão de transferência fria por 2-3 minutos até que possa ser usado.

Usar lembrete:

Depois de molhar, não deixe secar. Se a membrana secar parcialmente (tornando-se branca opaca), também deve ser remodelada.

4. Em seguida, montar o dispositivo de transferência, transferência clipe esponja almofada papel de filtro pré-molhado corte de membrana bem e pré-molhado gel papel de filtro esponja almofada clipe de transferência, cada camada colocada deve prestar atenção para evitar rugas, dobragem ou presença de bolhas (pode usar ferramentas de corte de plástico e outras para pressionar a bolha suavemente, para que cada camada se encaixe)

5. Inicie a transferência de acordo com as instruções do dispositivo de transferência usado para definir as condições operacionais.

6. Depois da transferência, retire a película de impressão e limpe brevemente os resíduos de gel em água ultrapura. As membranas de impressão podem ser armazenadas ao ar seco ou podem ser usadas imediatamente para etapas de teste imunológico.

Alguns fatores-chave para a realização bem-sucedida de experimentos de impressão de proteínas, como concentrações de proteínas, líquidos fechados e concentrações de anticorpos, podem precisar ser otimizados nos seguintes esquemas.

Teste imunológico padrão

Se a película de impressão estiver seca, molhe-a novamente e mergulhe em metanol por 15 segundos ou até que sua cor mude de branco opaco para cinza translúcido.

Enxague a película de impressão com água ultra-pura por 1 minuto.

3. Coloque a película de impressão no tampão fechado e agite suavemente para incubar por 1 hora.

4. Diluir a molécula em diluição de anticorpos comercializada, tampão de lavagem ou tampão fechado.

Coloque a membrana de impressão em uma solução diluída e incube a temperatura ambiente por 1 hora (ou 4 ° C durante a noite) e agite suavemente.

Use tampão de lavagem (incluindo Tween) ®- 20 tampão de surfactante (TBST ou PBST)) lavar a película de impressão 3-5 vezes por 5 minutos cada vez.

7. Diluir o diante em diluição de anticorpos comercializados, tampão de lavagem ou tampão fechado.

8. Coloque a membrana de impressão em uma solução de marcação enzimática diluída e incube a temperatura ambiente por 1 hora.

9. Lave a película de impressão 3-5 vezes com tampão de lavagem por 5 minutos cada vez.

Coloque a película de impressão em um recipiente limpo e adicione o reagente de teste correspondente.

11. Siga as instruções do reagente usado para o teste e incube por 1-5 minutos.

(1) Para os reagentes químicos luminescentes HRP ou AP, expor a membrana de impressão a um filme de raios X ou obter imagens digitais usando um sistema de imagem.

(2) Para a detecção de cor, adicione o reagente e aguarde o sinal.