U-Blot® Filme de impressão PVDF (0,2 μm)

U-Blot ® Filme de impressão PVDF (0,2 μm)É uma membrana microporosa de polifluoroetileno (PVDF) usada para transferir proteínas de várias matrizes de gel. Tem um melhor desempenho operacional em comparação com a membrana de nitrato de celulose.

Esta membrana hidrofóbica tem dois tipos de abertura: 0,45 μm e 0,2 μm, o que lhe permite ligar-se a proteínas de várias faixas de peso molecular:

• 0,45 μm: adequado para a maioria das proteínas, oferecendo maior sensibilidade de detecção.

• 0,2 μm de diámetro: adequado para proteínas com peso molecular inferior a 20.000, garantindo uma melhor adsorção e retenção de proteínas de pequenas moléculas.

U-Blot ® As membranas de impressão PVDF apresentam uma excelente retenção de proteínas, alta resistência física e uma ampla compatibilidade química, tornando-as uma escolha para imunoassays.

U-Blot ® Filme de impressão PVDF (0,2 μm)

Separe a amostra de proteína e o marcador de proteína com o gel SDS PAGE.

Corte e coloque o gel cuidadosamente e equilibre o gel em tampão de transferência fria por 5 a 20 minutos.

Corte a película e o papel de filtro para o tamanho adequado ao gel. A membrana PVDF é pré-molhada em metanol por 20 segundos até que a sua cor branca opaca se torne uniformemente cinzenta e, em seguida, mergulhe em água ultrapura por 1-2 minutos para remover os resíduos do reagente; Em seguida, equilibre no tampão de transferência fria por 2-3 minutos até que possa ser usado.

Usar lembrete:

Depois de molhar, não deixe secar. Se a membrana secar parcialmente (tornando-se branca opaca), também deve ser remodelada.

4. Em seguida, montar o dispositivo de transferência, transferência clipe esponja almofada papel de filtro pré-molhado corte de membrana bem e pré-molhado gel papel de filtro esponja almofada clipe de transferência, cada camada colocada deve prestar atenção para evitar rugas, dobragem ou presença de bolhas (pode usar ferramentas de corte de plástico e outras para pressionar a bolha suavemente, para que cada camada se encaixe)

5. Inicie a transferência de acordo com as instruções do dispositivo de transferência usado para definir as condições operacionais.

6. Depois da transferência, retire a película de impressão e limpe brevemente os resíduos de gel em água ultrapura. As membranas de impressão podem ser armazenadas ao ar seco ou podem ser usadas imediatamente para etapas de teste imunológico.

Alguns fatores-chave para a realização bem-sucedida de experimentos de impressão de proteínas, como concentrações de proteínas, líquidos fechados e concentrações de anticorpos, podem precisar ser otimizados nos seguintes esquemas.

Teste imunológico padrão

Se a película de impressão estiver seca, molhe-a novamente e mergulhe em metanol por 15 segundos ou até que sua cor mude de branco opaco para cinza translúcido.

Enxague a película de impressão com água ultra-pura por 1 minuto.

3. Coloque a película de impressão no tampão fechado e agite suavemente para incubar por 1 hora.

4. Diluir a molécula em diluição de anticorpos comercializada, tampão de lavagem ou tampão fechado.

Coloque a membrana de impressão em uma solução diluída e incube a temperatura ambiente por 1 hora (ou 4 ° C durante a noite) e agite suavemente.

Use tampão de lavagem (incluindo Tween) ®- 20 tampão de surfactante (TBST ou PBST)) lavar a película de impressão 3-5 vezes por 5 minutos cada vez.

7. Diluir o diante em diluição de anticorpos comercializados, tampão de lavagem ou tampão fechado.

8. Coloque a membrana de impressão em uma solução de marcação enzimática diluída e incube a temperatura ambiente por 1 hora.

9. Lave a película de impressão 3-5 vezes com tampão de lavagem por 5 minutos cada vez.

Coloque a película de impressão em um recipiente limpo e adicione o reagente de teste correspondente.

11. Siga as instruções do reagente usado para o teste e incube por 1-5 minutos.

(1) Para os reagentes químicos luminescentes HRP ou AP, expor a membrana de impressão a um filme de raios X ou obter imagens digitais usando um sistema de imagem.

(2) Para a detecção de cor, adicione o reagente e aguarde o sinal.