O NISTmAb é um anticorpo monoclonal amplamente caracterizado que foi projetado para ser usado como um marcador em novas técnicas de caracterização de proteínas desenvolvidas. Neste documento aplicativo, usamos o SUPR-DSF para obter lições sobre a fluorescência de varredura diferencial do NISTmAb (DSE), e os resultados de Cairo foram comparados com a DSO de varredura térmica de vida. O SUPR-DSE desenrola todos os dois domínios do NISTAb: CH2(690C.CH3(830)) e o domínio FAB (94oC) em vapor de alta resolução. Além disso, os valores de Tm medidos são consistentes com os relatórios da literatura. Estes resultados demonstram que a aplicação do SUPR-DSF facilita a obtenção de informações de alta qualidade sobre a estabilidade das proteínas.

Conclusão:

O SUPR-DSF da Protein Stable pode medir a temperatura de desencadeamento com rapidez e precisão detectando o deslocamento de pico da fluorescência endógena de proteínas. Os resultados mostraram que o SUPR-DSF é capaz de obter temperaturas de desencadeamento precisas, incluindo temperaturas de desencadeamento ultra-altas (94°C), como o domínio Fab. Isso também verificou que o SUPR-DSF baseado em fluorescência endógena pode obter resultados consistentes com o DSC. A vantagem de testar com uma placa de 384 buracos é que aumenta o fluxo, aumenta a conveniência e reduz o consumo de amostras.

Método:

O NISTmAb, com uma concentração de 1 mg/ml, foi preparado em um buffer de L-histamina a pH 6 e adicionado a placas microporosas LPCR de 384 poços com 104 L por poço, respectivamente. Após a partilha, a placa microporosa foi centrifugada após 60 segundos e selada com uma película transparente. Configurar o programa de mistura contínua no SUPR-DSF para medir o canal fluorescente de 150C a 105oC a uma taxa de aquecimento de 10C por minuto, os dados obtidos do espectro fluorescente são processados ​​por cálculo através do método BCM e quantificar o desvio espectral. Os dados do BCM são processados em função da temperatura e convertidos em derivadas de primeira ordem para análise. Calcule a temperatura de desencadeamento com base no pico da derivada. Todos os métodos e resultados da amostra estão disponíveis.