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Aplicações da cromatografia hidrofílica HILIC
Datas:2025-07-24Leia:1
Suíça
Aplicações da cromatografia hidrofílica HILIC
Aplicações cromatográficas
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Introdução
Quando estamos diante de algum experimento, o subconsciente é sempre mais inclinado a usar alguma maneira ou método que estamos muito familiarizados e tentar fazer um pequeno ajuste para torná-lo aplicável a todas as pesquisas aplicadas que estamos atualmente diante. Mas isso é como dizer que você tem uma faca muito boa para cortar vegetais não significa que seja a melhor maneira de serrar madeira. Hoje apresentamos mais um método de separação: a cromatografia de interação hidrofílica (HILIC).
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O HILIC é ideal para separar compostos altamente polares
Os compostos altamente polares geralmente não podem ser separados com as colunas cromatográficas típicas que conhecemos bem, a saber, cromatografia de fase positiva (NP) ou cromatografia de fase inversa (RP). Na cromatografia de fase positiva, como o próprio composto é muito viscoso em relação à fase polar fixa, isso pode levar a um tempo de lavagem muito longo. Os compostos altamente polares são caracterizados por uma boa solubilidade na fase de fluxo aquático e são incompatíveis com os solventes típicos usados por NP. Mesmo com o uso do sistema NP, os compostos altamente polares quase não interagem com a fase de fixação da polaridade não polar ou fraca e, finalmente, são lavados junto com a fronteira do solvente, não alcançando o objetivo da separação.
Sempre que isso acontece, é o Showtime da HILIC! Sua separação ocorre frequentemente em condições de fase polar fixa e solvente de fase inversa que pode ser usado em água. Neste caso, em comparação com o fluxo sem água, a fase de fluxo aquífero forma uma camada rica em água na superfície da fase polar fixa. A lavagem gradiental começa com um solvente orgânico de baixa polaridade que elimina os compostos polares aumentando a proporção de água polar.
A fase fixa tem maior polaridade na cromatografia de fase positiva, a fase fluente na cromatografia de fase inversa é geralmente composta por água e solventes orgânicos, enquanto a água é um forte detergente polar usado em sistemas de fase fluente comumente usados na cromatografia. Assim, o HILIC combina as características da fase fixa da cromatografia de fase positiva e da fase de fluxo da cromatografia de fase inversa para "lidar" especificamente com compostos altamente polares. Resumo simples: o HILIC usa um sistema de fase de fluxo cromatográfica de fase inversa, com picos em ordem cromatográfica de fase positiva.
Embora o mecanismo de padrão híbrido do HILIC ainda esteja sendo estudado, o principal mecanismo de retenção é considerado a distribuição dos compostos entre a fase de fluxo rica em matéria orgânica e a fase de fluxo rica em água posteriormente. Além disso, outras interações, como ligações de hidrogênio, interações eletrostáticas e interações dipolo-dipolo, são incluídas para ajudar na separação de HILIC:
Se você também está interessado na cromatografia HILIC, eu recomendo que você use o acetonitril, uma vez que tem boa intersolvência com água, bem como boa retenção de HILIC e baixa viscosidade. É claro que você também pode escolher outros solventes orgânicos de acordo com as circunstâncias específicas do experimento.
A força relativa do solvente no HILIC é a seguinte:
Acetona < propanol < acetonitril < etanol < dioxano < DMF ~metanol < água
No que diz respeito à sua fase fixa cromatográfica, qualquer fase polar pode ser usada para a separação HILIC. Por exemplo:
Tipo de fase fixa |
Exemplo de fase fixa |
Composição de fase fixa |
Aplicações |
Mecanismo de reserva |
Neutro |
diol; Amidas |
Grupos de função polar, tais como: amida, aspartamida, diol, diol cruzado, ciano e cicloxetina |
Hidrófilos e misturas de neutros, aniões e catiões |
interação hídrica; Sem interação eletrostática |
Com iões |
Slica； Aminopropilase |
Grupos Funcionais de iões ou catiões |
中性极性化合物 Carga positiva da banda de betamina da fase de aminopropina; Assim, mostra maior afinidade com compostos ácidos aniônicos. A superfície da Slica contém grupos de álcool silicano de superfície ácidos com pKa de 3,5, o que significa que, quando o pH é de ≥ 3,5 pKa, esses grupos serão ionizados, permitindo que a fase fixa da Slica funcione como um trocador catiônico, interagindo com bases carregadas positivamente e tratando o analítico para ser mantido. |
Interações eletrostáticas fortes a partir de grupos funcionais de íons ou catiões |
Íons de gênero |
Aminoácidos, aminosulfônicos |
Grupos funcionais com carga positiva (amônio) e carga negativa (ácido sulfônico) |
Devido às suas propriedades hidrofílicas e de troca íonica fraca, estas fixações são adequadas para a separação de analíticos neutros, ácidos e alcalinos, bem como compostos polares e hidrofílicos e íons inorgânicos. |
Interações eletrostáticas fracas |
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Conclusão
Um bom princípio para escolher a fase fixa HILIC ideal é que, geralmente, os compostos neutros são menos hidrofílicos do que os compostos carregados, e as fases fixas altamente hidrofílicas precisam mantê-los (por exemplo, as fases fixas de íons bigêneros e amidas). Por outro lado, devido à gravidade eletrostática, a retenção dos compostos carregados na coluna cromatográfica carregada é muito forte e, portanto, as fases de íons neutras e duplas fornecem melhores resultados.
Na verdade, independentemente da cromatografia de fase positiva, cromatografia de fase inversa ou cromatografia HILIC, existem áreas de aplicação adequadas. Mesmo que o HILIC combine algumas características da cromatografia de fase positiva com a cromatografia de fase inversa, isso não significa que ele atenda a todas as aplicações. Assim como nós comemos diariamente, comer macarrão com bastões é uma maneira simples e eficaz; É melhor beber sopa com uma colher. O mesmo acontece com os experimentos, portanto, durante o processo experimental, a melhor forma de purificação deve ser escolhida de acordo com as circunstâncias reais.