O WesternBlottingSystem é um dispositivo automatizado para a detecção e análise de proteínas, amplamente utilizado em áreas como pesquisa em ciências da vida, diagnóstico clínico e desenvolvimento de medicamentos. É capaz de automatizar as etapas de separação de proteínas, eletroforese, transmembrana, fechamento, incubação de anticorpos, colorização, etc., melhorando a eficiência experimental e reduzindo os erros de operação manual. Abaixo estão os princípios técnicos do sistema.
Isolação de proteínas (eletroferese SDS-PAGE)
Princípio: As proteínas são separadas no campo elétrico de acordo com o seu peso molecular. As proteínas das amostras são tratadas com SDS (sulfato de sódio de docealquilo) para carregá-las com carga negativa e degenerar, perdendo sua estrutura original e transformando-se em moléculas lineares. Em seguida, a amostra é carregada no gel e, após a aplicação do campo elétrico, as proteínas migram no gel de acordo com o tamanho molecular, com proteínas menores migrando mais rápido e proteínas maiores migrando mais lentamente.
Automação: no sistema totalmente automático de impressão de proteínas, este processo é concluído pelo módulo de eletróforese automática, capaz de amostrar automaticamente, ajustar as condições de eletróforese, terminar o experimento em tempo, etc.
Transferência (transferência de proteínas)
Princípio: As proteínas isoladas por eletroforese precisam ser transferidas para uma membrana sólida, como a membrana PVDF ou a membrana de celulose nitrata, para testes posteriores. O processo de transmembranação é geralmente um método de transferência elétrica, transferindo proteínas do gel para a membrana. A eficiência da transferência está intimamente relacionada com fatores como a escolha da membrana, a corrente e o tempo.
Automação: o sistema totalmente automático de impressão de proteínas controla automaticamente a tensão e o tempo da membrana e monitora o efeito da transferência em tempo real durante o processo experimental para garantir a transferência completa da proteína.
3. Fechado
Princípio: Após a transformação da membrana, para evitar a ligação não específica, a membrana precisa ser fechada. As etapas de fechamento geralmente usam 5% de leite em pó desgorduro ou solução de BSA para fechar o vazio na membrana, impedindo que os anticorpos se liguem não especificamente à membrana.
Automação: o sistema pode adicionar automaticamente o líquido fechado, controlar o tempo de incubação e a temperatura para garantir a uniformidade do processo de fechamento.
Incubação de anticorpos
Princípio: Esta etapa envolve o uso de anticorpos específicos para detectar proteínas alvo. Primeiro é incubada com anticorpos primários contra a proteína alvo e, em seguida, com anticorpos secundários que são capazes de reconhecer anticorpos primários e carregar marcadores detetáveis (como enzimas ou grupos fluorescentes).
Automação: o sistema totalmente automático de impressão de proteínas adiciona automaticamente soluções de anticorpos, ajusta o tempo de incubação, a temperatura e lava automaticamente a superfície da película para remover anticorpos não ligados e reduzir o ruído de fundo.
5. lavagem
Princípio: após a incubação de anticorpos, geralmente há alguns resíduos de anticorpos não ligados na membrana. As etapas de lavagem removem esses anticorpos e impurezas não ligados através de tampão para reduzir o sinal de fundo e melhorar a especificidade da detecção.
Automação: o sistema de automação é capaz de adicionar automaticamente o líquido de lavagem e realizar várias lavagens conforme necessário, garantindo que a superfície da membrana seja limpa e reduza a interferência de fundo.
Detecção de cores ou fluorescência
Princípio: Após a incubação de anticorpos, a detecção de proteínas alvo geralmente depende da coloração ou da geração de sinais fluorescentes. Os métodos de teste mais utilizados incluem:
Luminescencia Química (ECL): anticorpos secundários geralmente carregam enzimas (como HRP ou AP) que liberam sinais luminosos depois de reagirem com o substrato para serem detectados usando equipamentos ópticos.
Detecção de fluorescência: se anticorpos marcados por fluorescência forem usados, o sistema de detecção estimula e captura o sinal fluorescente emitido por luz de comprimentos de onda específicos.
Automação: o sistema totalmente automático de impressão de proteínas adiciona automaticamente o substrato colorido, controla o tempo de resposta e usa um sistema de imagem integrado para a detecção.
Análise de dados e geração de relatórios
Princípio: Determine a quantidade de expressão da proteína alvo através de um software de análise de imagem para quantificar o sinal colorido ou fluorescente. Isto geralmente é analisado quantitativamente comparando o brilho ou a intensidade de fluorescência da faixa proteica na amostra com os padrões de concentração conhecidos.
Automação: o software de análise de dados incorporado ao sistema automatiza o processamento de imagens para gerar relatórios, incluindo a expressão de proteínas, o peso molecular da faixa, o contraste entre amostras e muito mais.
Características técnicas
Totalmente automatizado: o sistema de impressão de proteínas totalmente automático pode automatizar uma série de operações, desde a separação de proteínas, eletroforese, transmembrana, fechamento, incubação de anticorpos, lavagem até exibição de cores, melhorando significativamente a eficiência e a repetibilidade experimental.
Alta potência: sistemas de automação modernos podem processar várias amostras simultaneamente, adequados para experimentos em grande escala.
Controle preciso: o sistema pode controlar com precisão o tempo, a temperatura e as condições de reação de cada etapa experimental para reduzir os erros de operação humana.
Processamento e análise de dados: o software integrado de análise de imagem automatiza a análise quantitativa dos resultados experimentais para fornecer dados mais precisos e reprodutíveis.
Fácil de operar: basta definir os parâmetros experimentais e o sistema automatiza todo o processo experimental e gera relatórios detalhados, reduzindo o trabalho complicado.
Resumo
O sistema totalmente automático de impressão de proteínas pode automatizar as etapas experimentais e melhorar significativamente a eficiência experimental e a precisão dos dados. Seus principais princípios técnicos incluem separação de proteínas, transferência elétrica, incubação de anticorpos, coloração ou detecção de fluorescência, e cada etapa é controlada com precisão e otimizada para detecção de proteínas de alto fluxo e baixo erro.