O teste de número total de colônias (ou papel bacteriano) é uma ferramenta de detecção microbiana usada para detectar o número de bactérias em amostras de água, alimentos, medicamentos, ar, etc. Este método é frequentemente usado para determinar rapidamente e facilmente a contaminação bacteriana em amostras. Observando o crescimento das colônias em folhas de papel, o conteúdo microbiano na amostra pode ser avaliado preliminarmente. Abaixo estão os passos para observar os resultados do teste microbiano do número total de colônias:
1. Preparação
Preparação da amostra: de acordo com o tipo de amostra testada (por exemplo, água, ar, alimentos, etc.), prepare a amostra para teste de acordo com as etapas operacionais especificadas.
Operação estéril: durante a operação, certifique-se de que todas as ferramentas, recipientes e ambientes são estériles para evitar o impacto da poluição externa nos resultados do teste.
Preparação do comprimido: Certifique-se de que o número total de comprimidos de colônia está dentro do prazo de validade e armazenado de acordo com as instruções. Verifique se o comprimido está seco e não danificado.
2. Passos operacionais
Vacinação da amostra: A amostra é uniformemente vacinada sobre a placa de teste de acordo com os requisitos do teste (por exemplo, diluição, volume de amostragem, etc.). Certifique-se de que as mãos do operador ou outras ferramentas não estejam contaminadas durante a vacinação e evite a contaminação cruzada.
Cultivo: Coloque os comprimidos vacinados em condições de cultivo apropriadas (geralmente uma caixa termostática a 37°C). De acordo com os requisitos experimentais, a cultura geralmente requer 24-48 horas, dependendo do tipo de amostra e da taxa de crescimento das bactérias.
Observação: após a cultura, observe se as colônias crescem no papel. As colônias são geralmente pequenos pontos redondos brancos ou claros, o tamanho, a forma e a cor podem variar de acordo com a espécie de bactéria.
Tipo e número de colônias observadas
Número de colônias:
Contagem de colônias: Cada colônia visível representa uma bactéria. De acordo com os resultados da cultura, a quantidade de bactérias em cada unidade de amostra é calculada (geralmente representada pelo número de colônias por ml ou por grama de amostra).
Determinação do valor padrão: Determinar se a amostra de teste cumpre os requisitos de higiene, segurança ou qualidade de acordo com padrões nacionais ou industriais. Em geral, o valor padrão para o número total de colônias varia de acordo com o tipo de amostra.
Forma da colônia:
Diferentes formas de colônia: as colônias no teste podem apresentar cores, formas e tamanhos diferentes, o que pode fornecer pistas para a identificação microbiana posterior.
Características comuns da colônia:
Redondo: comum na maioria das bactérias.
Forma irregular: pode ser um tipo especial de bactéria.
Bordas claras e vagas: as colônias com bordas claras geralmente são puras culturas, enquanto as bordas vagas podem indicar que a flora é mais complexa.
Alterações de cor: Algumas bactérias podem secretar pigmentos durante a cultura, causando mudanças de cor na colônia. Por exemplo, o stafilococco amarelo dourado produz colônias amarelas douradas, indicando seu crescimento.
Determinação dos critérios de contagem das colônias
Dependendo do tipo de amostra (por exemplo, água potável, alimentos, medicamentos, etc.), existem requisitos padrão diferentes. Por exemplo:
Água potável: o padrão comum é que o número total de colônias por ml de água não deve exceder 500.
Alimentos: os critérios para o número total de colônias em alimentos podem ser mais rigorosos e geralmente são controlados dentro de uma determinada quantidade (por exemplo, o número total de colônias por grama de alimento não deve exceder 10.000).
Determinação de excesso: se o número de colônias do teste exceder o valor padrão, a amostra está gravemente contaminada com bactérias e pode apresentar riscos de segurança alimentar, problemas de higiene ou outros problemas de qualidade.
6. Análise dos resultados
Baixo número de colônias: se o número de colônias for baixo ou nenhum crescimento, o conteúdo de micróbios na amostra é baixo e os padrões de higiene são cumpridos.
Número elevado de colônias: se mais colônias forem detectadas, isso indica que a amostra pode estar contaminada. É necessário analisar mais as possíveis fontes de poluição e tomar as medidas sanitárias adequadas.
Colônias de diversidade: se a morfologia da colônia for observada, pode indicar que há uma variedade de bactérias diferentes na amostra que precisam ser identificadas por meio de testes bioquímicos adicionais, testes moleculares e outros.
Perguntas frequentes e resolução de problemas
Sem crescimento de colônias: se a pilha de ensaio não apresentar colônias, pode ser devido a uma quantidade insuficiente de vacinação, tempo de cultivo insuficiente, tratamento inadequado de amostras, etc. A quantidade de vacinação pode ser aumentada ou o tempo de cultivo pode ser prolongado.
Excesso de colônias: Se houver muitas colônias, pode ser devido à poluição excessiva das amostras e à desigualdade da vacinação da superfície do comprimido. Neste momento, o teste pode ser realizado novamente por meio de amostras diluídas.
8. Atenção
Os resultados são apenas para fins informativos: o teste de número total de colônias é uma ferramenta de triagem e não representa completamente todas as espécies e quantidades de micróbios na amostra. Para uma análise mais aprofundada das espécies e características microbianas da amostra, uma identificação microbiana mais detalhada pode ser necessária.
Fatores ambientais: o modo como a amostra é tratada, a temperatura ambiente e a umidade podem afetar o crescimento da colônia, por isso é necessário manter as condições experimentais consistentes durante a operação.
Observando o crescimento de colônias de bactérias em folhas de papel, a contaminação microbiana na amostra pode ser avaliada preliminarmente para ajudar os testadores a avaliar a qualidade e a segurança da amostra.