A detecção de filtragem microbiana é o processo de enriquecimento de micróbios em amostras por métodos físicos ou químicos para isolar e identificar as espécies alvo. Este método é amplamente utilizado em áreas como teste de qualidade da água, teste estéril de medicamentos e análise de contaminação microbiana de alimentos. Os objetos comuns de teste incluem bactérias (por exemplo, E. coli, Staphylococcus aureus), fungos (por exemplo, mofo, levedura), etc. A separação e identificação precisas são essenciais para garantir a confiabilidade dos resultados dos testes.
Métodos de filtração e separação microbiana
2.1 Tratamento pré-amostra e filtração
A filtração microbiana é geralmente utilizada pela filtração de membrana (MF) para amostras líquidas (por exemplo, água, bebidas). Os passos são os seguintes:
Preparação da amostra: homogeneizar amostras líquidas ou sólidas (por exemplo, os alimentos precisam ser diluídos homogeneamente).
Filtração: retenção de micróbios através de uma membrana de filtro com um orifício de 0,22-0,45 μm.
Transferência: a membrana filtrante é pega a um meio seletivo ou não seletivo para a cultura.
2.2 Tecnologia de separação seletiva
Os diferentes micróbios requerem meios e condições específicas de cultura:
- Bactérias:
E. coli: Use EMB (Agar Vermelho-Azul) ou Agar MacConkey (Agar MacConkey).
- Staphylococcus amarelodorus: uso de resina de alto sal de glicerol (MSA).
- Fungos:
- Fogos e leveduras: Use a aguana de glicose sandalínea (SDA) para adicionar antibióticos para inibir o crescimento das bactérias.
Tecnologia de identificação microbiológica
3.1 Identificação morfológica
Características da colônia: observar a morfologia da colônia (tamanho, cor, bordas, textura da superfície).
- como Staphylococcus amarelo dourado, suave protuberância; As colônias de mofo são pelosas.
- Observação ao microscópio: coração de Grant (distinção entre bactérias G - - G G - - - G - - - G - - - - G + / G - bactérias), bactérias bactérias, etc.
3.2 Experimentos bioquímicos
Identificação de espécies por propriedades metabólicas:
Teste de oxidase: distinguir entre falsos monocitos (positivos) e E. coli (negativos).
Teste IMViC: Identificação de E. coli (padrão de resultado + + -).
Testes de fermentação de açúcar: tais como a capacidade de fermentação da lactose para distinguir entre E. coli e salmonella.
3.3 Métodos de Biologia Molecular
Sequenciamento de -16SrRNA: o "padrão ouro" para a identificação bacteriana, com precisão a nível de gênero ou espécie.
Tecnologia de PCR: teste de amplificação para genes específicos, como o gene uidA de E. coli.
MALDI-TOFMS: Identificação rápida de micróbios através de mapas de impressões digitais de proteínas.
Aplicações e desafios
4.1 Aplicação prática
Monitoramento da qualidade da água: detecção da flora total do colon na água e bactérias patogênicas (por exemplo, Legions).
Inspeção estéril de medicamentos: certifique-se de que as injeções e os produtos biológicos não estejam contaminados por micróbios.
Segurança alimentar: detecção de salmonela, listeria, etc. em alimentos.
4.2 Desafios técnicos
Teste microbiano de baixa abundância: a cultura enriquecida é necessária quando o teor de bactéria alvo na amostra é baixo.
Interferência gerótica: amostras complexas (por exemplo, fezes, solo) precisam ser otimizadas em meios seletivos.
Identificação rápida das necessidades: os métodos tradicionais levam tempo e exigem a promoção da tecnologia de biologia molecular.