Antes da amostragem: determinar as necessidades e preparar a base

O planejamento pré-amostragem é uma premissa para garantir o efeito, e é necessário desenvolver programas direcionados para fins de teste (por exemplo, monitoramento ambiental, avaliação do efeito da desinfecção, análise científica, etc.).

1. escolha razoável do tipo de amostrador

Os amostradores de diferentes princípios são adequados a diferentes cenários e características microbianas, e a escolha do tipo de correspondência é a base:

Amostradores de impacto (por exemplo, amostradores de impacto cascais Anderson, amostradores de impacto de fissura): o impacto de micróbios sobre o meio de cultura ou a membrana de captura por meio de fluxos de ar de alta velocidade é adequado para a detecção de bactérias vivas que precisam ser cultivadas (por exemplo, determinação do número total de colônias), especialmente para capturar micróbios de diferentes tamanhos de partículas (impactos cascais podem diferenciar a distribuição de partículas de aerossóis).

Amostradores de filtro (por exemplo, amostradores de filtro de membrana): usando a membrana de filtro (por exemplo, a membrana de policarbonato, a membrana de celulose misturada) para capturar micróbios, adequado para a detecção de alta sensibilidade (por exemplo, quantificação qPCR, detecção de vírus), ou para analisar simultaneamente os cenários de associação de micróbios e partículas, mas deve prestar atenção ao efeito do material da membrana de filtro sobre a atividade microbiana (por exemplo, escolher a membrana de filtro de baixa adsorção).

Amostradores sedimentares (por exemplo, métodos de sedimentação em placa plana): simples de operar, mas ineficientes, apenas adequados para rastreamento de micróbios ambientais grosseiros (por exemplo, monitoramento diário em salas limpas) e não recomendados para amostragem de micróbios de baixa concentração ou tamanho de partículas pequenas.

Amostrador centrífugo: separação de micróbios por força centrífuga, adequado para amostragem de cenários de fluxo (por exemplo, oficinas, locais públicos), com a vantagem de ser pequeno e portátil, mas a eficiência de captura é muito afetada pela estabilidade do fluxo de ar.

2. Otimizar a seleção do meio de captura

Os meios de captura (meio, membrana, absorvente) determinam diretamente a eficiência de captura e a capacidade de sobrevivência dos micróbios:

Escolha do meio: escolha de meio específico de acordo com as propriedades microbianas alvo (por exemplo, detecção de agar nutricional para bactérias, PDA de agar de glicose de batata para fungos, meio seletivo para bactérias patogênicas); Certifique-se de que o meio seja fresco (refrigerado a 4 ° C após a preparação por não mais de 7 dias), com espessura uniforme (cerca de 3-5 mm) e evite rachaduras secas ou poluição.

Escolha da película de filtro: a escolha preferencial de baixa adsorção e alta porosidade da película de filtro (como a película de PTFE de politetrafluoroetilo, a película de nitrato de celulose) para reduzir a perda de micróbios devido à eletricidade estática ou à adsorção; O diámetro da membrana de filtro deve corresponder ao tamanho microbiano (geralmente 0,22 μm ou 0,45 μm, a amostragem de vírus pode ser feita com uma membrana de filtro de 0,1 μm).

Escolha do líquido de absorção: quando usado em amostradores de absorção líquida, o líquido de absorção deve ter em conta a "eficiência de captura" e a "manutenção da atividade microbiana" (por exemplo, com água salina fisiológica ou tampão com 0,05% -0,1% de Twain 80 para reduzir a deposição e a adsorção microbiana; amostragem de vírus pode adicionar seroproteína bovina BSA para proteger a estrutura do vírus).

Evitar a poluição pré-amostragem

A amostragem de micróbios é vulnerável aos efeitos da poluição externa e precisa controlar rigorosamente o "ambiente estéril" antes da amostragem:

Os amostradores (por exemplo, a cabeça de pulverização do amostrador de impacto, a pinça de filtro, o tubo de amostragem) devem ser esterilizados com antecedência (esterilização a vapor de alta pressão a 121 ° C / 20 min, ou esterilização a calor seco a 160 ° C / 2 h; os componentes de plástico podem ser esterilizados por ultravioleta após 30 min de limpeza com 75% de álcool).

Os meios de captura, como os meios de cultura e as membranas de filtro, devem ser carregados em condições estériles (por exemplo, operação em mesas de trabalho ultra-limpas) para evitar contato manual ou exposição à poluição do ar.

"Pré-equilibrar" a área de amostragem antes da amostragem (por exemplo, fechar a janela e a porta 30 minutos antes da amostragem da sala limpa para evitar que a pessoa cause perturbações no fluxo de ar).

Em amostragem: configuração de parâmetros otimizados e especificações operacionais

O controle de parâmetros e os detalhes operacionais durante o processo de amostragem são essenciais para melhorar a eficiência da captura e precisam ser ajustados dinamicamente de acordo com o princípio do amostrador e as condições ambientais.

Parâmetros de amostragem essenciais otimizados

Ajuste os parâmetros-chave de acordo com o tipo de amostrador e as necessidades de detecção para maximizar a eficiência da captura:

Fluxo de amostragem: o fluxo deve corresponder ao projeto do amostrador (por exemplo, o amostrador Anderson recomenda um fluxo de 28,3 L / min, o amostrador de fenda pode configurar 10-30 L / min). Um fluxo muito baixo pode levar à captura insuficiente de micróbios de pequenas partículas (<5 μm); O fluxo excessivo pode resultar em desativação de micróbios ou salpicaduras no meio de cultura devido a choques de fluxo de ar. Recomenda-se a calibração do fluxo com o "calibrador de fluxo" antes da amostragem (controle de erro dentro de ± 5%).

Tempo de amostragem: é necessário equilibrar a "quantidade de captura" e a "atividade microbiana". A amostragem de curto tempo (5-15 min) é adequada para ambientes de alta concentração (por exemplo, oficinas de poluição) para evitar excesso de umidade no meio ou acumulação excessiva de micróbios; A amostragem prolongada (30-60min) é adequada para ambientes de baixa concentração (por exemplo, sala limpa, sala de cirurgia), mas note: o tempo de amostragem do amostrador de impacto não deve exceder 60min (para evitar a secagem do meio de cultura), o amostrador filtrado deve evitar o bloqueio da membrana de filtro (partículas grandes podem ser removidas por pré-filtração).

Altura e posição da amostragem: Determine o ponto de amostragem de acordo com a finalidade do teste:

Monitoramento ambiental: a altura da amostragem é de 1,2-1,5 m (plana com a cintura respiratória humana), com 3-5 pontos de amostragem em cada área (distribuída uniformemente, evitando os cantos da parede, a abertura de ventilação e a fonte de poluição exatamente acima).

Avaliação do efeito da desinfecção: amostragem no mesmo local antes e depois da desinfecção para garantir a consistência do contraste.

Rastreabilidade de aerossóis: pontos de amostragem podem ser definidos em diferentes alturas (por exemplo, 0,5 m, 1,5 m, 3 m) para analisar a distribuição vertical dos micróbios.

Controle de estabilidade do fluxo de ar: durante a amostragem, evite que o amostrador seja diretamente orientado para a abertura de ventilação, o ventilador ou a direção de movimento da pessoa; Desligue o dispositivo de ventilação local, se necessário, ou use uma tampa de vento para fixar o amostrador para reduzir o desvio de amostragem causado pelas perturbações do fluxo de ar.