1、Utilização:

A coluna de imunoafilidade pode adsorber seletivamente a tracitoxina A no líquido de amostra de medicamentos, desempenhando assim um efeito de purificação muito direcionado para a amostra. O líquido de amostra purificado após a coluna pode ser usado diretamente para análise HPLC ou detecção com LC-MS / MS após a solução de sopro de nitrogênio.

2、Visão geral:

Ohratoxina A (OTA), é um metabolito tóxico produzido por certas espécies de bactérias do gênero Ohratoxina e Penicilia, é uma toxina fúngica com forte veneno renal e hepático e com efeitos teratogenos, mutagênicos e cancerígenos.

3、Princípio:

A base para a determinação é a reação de antígenos e anticorpos, os anticorpos são ligados ao corpo da coluna, a amostra é extraída, filtrada e lentamente passa pela coluna de imunoafilidade da tramicina A, a toxina na coluna de imunoafilidade se liga aos anticorpos, e depois a coluna de imunoafilidade é lavada para remover outras substâncias não ligadas. Lave a tracitoxina A com metanol e injete-a no instrumento de análise para a detecção.

4、Composição da embalagem:

Cada caixa inclui uma coluna de afinidade imunológica de Trabamoxina A de várias especificações e um manual.

5、Os materiais necessários, mas não fornecidos na caixa:

5.1 Equipamento e Consumíveis

--- HPLC / LC-MS / MS

--- Suporte de operação de controle de ar

--- Bomba de ar

--- Balanças

--- homogeneizador de alta velocidade (≥10.000/min) ou agitador

--- triturador

--- Separação

--- cilindro de medição: 100mL / 10mL

Seringa: 20 ml

Pipeta ou tubulação: 1 ml

--- Copa homogênea (ou garrafa cone de 250 ml)

---- garrafa de amostra

---- garrafa de medição

5.2 Reagentes

Metanol (CH)₃OH): Puro por análise no processo de extração / Puro por cromatografia no processo de lavagem

Cloreto de sódio (NaCl): análise pura

Ácido clorídrico (HCl): Análise pura

Hidroóxido de sódio (NaOH): análise pura

Disódio fosfato de hidrogênio (NaH)₂PO₄:: Análise pura

Dihidrogénio fosfato de potássio (KH)₂PO₄:: Análise pura

KCl: Análise pura

Twain-20 (C)₅₈O H₁₁₄O₂₆:: Análise pura

Água (H)₂O): água destilada ou deionização

6、Atenção:

Antes do uso, a coluna de imunoafilidade deve voltar à temperatura ambiente (22 a 25 ° C).

--- Coluna de afinidade 2-8 ° C armazenado, não deve congelar.

--- Por favor, use a coluna de imunoafilidade dentro da data de validade.

--- É necessário esvaziar o líquido dentro da coluna e fazer a operação acima.

Volume de amostragem: de acordo com a necessidade, a quantidade de amostragem pode ser aumentada ou reduzida adequadamente, observando que a quantidade de líquido de extração deve ser alterada de acordo.

--- Capacidade da coluna: a capacidade da coluna é de 200ng, quando o conteúdo de toxinas na amostra é dividido pelo múltiplo de diluição superior à capacidade da coluna, é necessário reduzir adequadamente o volume do líquido da amostra e re-testar.

---pH: o pH da solução de amostra superior da coluna de afinidade deve estar entre 6 e 8, se desviar dessa faixa, o pH deve ser ajustado com ácido clorhídrico ou hidroxido de sódio.

--- A consistência do solvente e da fase de fluxo durante a detecção de bordo pode eliminar o efeito do solvente.

--- Tramicina pode causar câncer, deve usar máscaras de luvas e outras ferramentas de proteção para operação.

Os recipientes usados e a solução padrão são mergulhados durante a noite em solução de hipoclorato de sódio (5% V / V).

7、Preparação do líquido de teste:

7.1 Extração líquida

Solução metanol-água a 70% (metanol V: água V = 70:30): Tome 700 ml de metanol e adicione água deionizada para 1 L.

7.2 Solução tampão de fosfato (PBS)

Pese 8,00 g de cloreto de sódio, 1,20 g de fosfato de hidrogênio de sódio (ou 2,92 g de fosfato de hidrogênio de sódio), 0,20 g de fosfato de hidrogênio de potássio, 0,20 g de KCL, dissolva-o em 900 ml de água, ajuste o pH com ácido clorhídrico para 7,0 ± 0,1 e adicione água para diluir até 1000 ml.

7.3 Tampon de fosfato de Twain (PBST)

Tome 1 mL de Twain-20 e dilua o tampão PBS para 1000 mL.

8 eTratamento de amostras：

--- amostra de 3 g ± 0,01 g (a amostra sólida deve ser esmagada e filtrada por 2 mm), cloreto de sódio de 3 g em uma garrafa homogênea, adicionando 60 ml de extração (ver 7.1);

--- homogeneidade de alta velocidade (≥10,000r/min) 2min;

--- Centrífuga 10min (8000r / min);

--- Tome 5 ml de líquido superlíquido e coloque-o em uma garrafa de 50 ml, dilua com tampão PBS até a escala, misture e centrifuge por 15 min (8000r / min);

--- Tome 20 ml de líquido líquido sobre a coluna de imunoafilidade para purificação.

Múltiplo de diluição: 10

9、Procedimento operacional:

9.1 Assim como

--- Retire a coluna de afinidade imunológica e penetre diretamente a extremidade inferior do cilindro da seringa na coluna de afinidade

O tampão quadrado, concluir a conexão do cilindro da seringa com a coluna de afinidade, colocá-lo no suporte de operação controlado por ar para a fixação;

--- Depois de esvaziar o líquido da coluna de afinidade, extrair o líquido da amostra da etapa 8 e injetar no cilindro da seringa;

- deixar o líquido fluir a uma velocidade de 1 a 2 gotas / segundo;

9.2 Lavagem

--- para secagem líquida;

--- Em seguida, com 10 mL de tampão LPBST (ver 7.3), 10 mL de água para lavar a coluna de imunoafilidade, a velocidade de fluxo de 2 ~ 3 gotas / s;

9.3 Limpeza

--- Depois de secar o líquido, retirar a seringula, secar o líquido na coluna de afinidade, lavar com 1,5 ml de metanol, recolher o líquido de lavagem em uma garrafa de amostra de 2 ml, diluir com água até a escala, misturar;

--- Depois de ser filtrado com um filtro de microporo de 0,22 μm, transferido para uma garrafa de amostra para análise HPLC.

* Seque o último líquido antes de cada amostra.

10、Resultado interpretado:

Conteúdo de Tracetoxina A = concentração de detecção x múltiplo de diluição

11 eCondições de armazenamento e prazo de validade：

Condições de armazenamento: 2 ~ 8 ° C.

Válidade: O produto é válido por 18 meses.