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Jiangsu Green Alliance Scientific Instrument Co., Ltd
Dominar o uso correto do tubo centrífugo ultrafiltrado é a chave para garantir o sucesso dos experimentos
Datas:2025-12-01Leia:1
O tubo centrífugo ultrafiltrado é um material de consumo de laboratório integrado na tecnologia de separação de membrana e centrífuga, amplamente utilizado em operações bioquímicas como concentração de proteínas, desalinização, substituição de tampão, purificação de ácidos nucleicos e remoção de pequenas moléculas. Seu núcleo é uma membrana ultrafiltrada incorporada com um peso molecular específico de retenção, que conduz a amostra através dos orifícios da membrana por meio de força centrífuga para alcançar a separação eficiente das moléculas alvo. No entanto, a operação incorreta pode causar obstrução da membrana, perda de amostras, baixa taxa de recuperação e até a ruptura do tubo. Conhecer seu uso correto é fundamental para garantir o sucesso dos experimentos.
Preparação antes do uso
Selecção precisa de membrana por peso molecular: a macromolécula alvo deve ser maior que 2-3 vezes o MWCO e as impurezas moleculares pequenas menores que 1/2 MWCO, para garantir a retenção e a passagem eficazes;
A superfície da membrana umidificante (se necessário): para a membrana hidrofóbica (como PVDF), primeiro adicionar uma pequena quantidade de tampão ou etanol umidificar por 5 minutos, em seguida, remoção centrífuga para evitar que a resistência do ar afete a velocidade de fluxo;
Verifique a integridade do tubo: certifique-se de que o filtro não está quebrado e que o anel de vedação da tampa está intacto para evitar vazamentos centrífugos.
Especificações de carga de amostras
Volume de amostra de controle: geralmente não excede 75% da capacidade máxima do tubo centrífugo (por exemplo, amostragem de tubo de 15 mL ≤ 11 mL), reservando espaço de concentração;
Tratamento pré-esclarecimento: as amostras que contêm partículas ou fragmentos celulares devem ser centrifugadas a baixa velocidade (por exemplo, 3.000 x g, 5min) ou filtradas para evitar o bloqueio dos orifícios da membrana;
Evite alta viscosidade ou alta concentração de amostragem direta: pode ser diluído adequadamente para aumentar o fluxo inicial.
Configuração de parâmetros de centrifugação
Referência à velocidade de rotação recomendada pelo fabricante: geralmente 3.000-5.000 x g, exceso de velocidade estritamente proibido (veja o valor máximo de RCF marcado na parede do tubo);
Definir o tempo apropriado: centrifugar em etapas (por exemplo, 10-15 minutos de cada vez), observar o volume do líquido concentrado e evitar a membrana seca;
Operação a baixa temperatura: para proteínas sensíveis ao calor, use uma centrífuga congelada de 4 ° C para evitar a degeneração.
Técnicas de concentração e lavagem
Substituição de tampão: quando concentrado para cerca de 100-200 μL, adicionar um novo tampão de volume, misturar e centrifugar, repetir 2-3 vezes para remover > 95% de impurezas de pequenas moléculas;
Evitar a secagem da membrana: o ponto final da concentração retém pelo menos 50 μL de líquido e a membrana seca reduz irreversivelmente a taxa de recuperação;
Misturar suavemente: soprar lentamente com um pipete para não danificar as moléculas com choques fortes.
Reciclagem e limpeza (se reutilizável)
A maioria dos tubos centrífugos ultrafiltrados são projetados para uso único, mas alguns modelos podem ser reutilizados;
Lavar imediatamente após o uso com água deionizada e depois mergulhar com 0,1 MNaOH ou líquido de limpeza especial para remover os resíduos;
É estritamente proibido esterilizar ou secar a alta pressão para evitar deformações da estrutura da membrana.