Introdução

São necessárias várias aplicações biológicas para monitorar o número de células, a reprodução, a saúde, a fusão e a citotoxicidade.NadaMarcar as célulasdetecçãoEstas aplicaçõesprecisarUsar transmissão de luz eficaz e confiável(TL)Funções de imagem e análise que fornecem segmentação precisa para quantificar as células e avaliar uma variedade de respostas e morfologia celulares. Além disso, a combinação de imagens de luz transmissível de alto contraste com imagens marcadas por fluorescência para muitos testes baseados em célulasAnáliseÉ muito importante.

MetaXpress 6.5Editor de módulos personalizadosTLUm algoritmo de divisão celular é um tipo de imagem que usa a luz transmitida para as células.eAlgoritmos de análise quantitativamente otimizados e confiáveis. Esta aplicação mostraTLUtilidade e precisão da divisão celular- É.Análise e quantificação comparando a contagem total de células na luz transmitida com a contagem de núcleos de coloração fluorescenteCHOeHeLaAlgoritmo das células (Figura) 1）- É.

Método

SeráCHOeHeLaDilução celular vacinada para preto, fundoTransparente.96O buraco na placa, linha do topo da placaPlaca inicial (na linha superior)Cada buraco20，000Uma célula.）pressione cada célula.1：2A proporção éPara baixo na placa microporosaDilução，6Um buraco.- É.Cultura celular24HorasDepoisEm37°Ce5% de CO2 Utilização na caixa de cultivoHoechst 33342CélulasColorante nuclear para as células30Um minuto. Em seguida, use4%células de fixação poliformaldeído e comDPBSLavar duas vezes. AtravésImageXpressMicro®Sistemas de imagem de alto conteúdo eMetaXpressO software faz imagens das células. Utilização10x plano de flúorObjetivo para imagem de um campo de visão que pode capturar com precisão até1500Uma célula. Utilização de luz transmitida eDAPICanal fluorescente para tirar imagens, tempo de exposição15 mse35 ms- É.

Vantagens

Utilização
Par de imagem de luz transmissívelObjecto alvoMonitoramento de segmentação e contagemA luz transmitida.proliferação celular

Utilização de vários métodos de análiseAvaliaçãoTLEfeitos do algoritmo de divisão celular

Conheça os vários tipos e tamanhos de célulasFerramentas de quantificação
Ferramentas quantitativas e analíticas

Gráfico 1：Configuração para a análise da luz transmitidaFilmardoHeLaeCHOCélulasImagensmódulos personalizados. fazerusarHoechst 33342CélulasOs corantes nucleares coloram as células. UtilizaçãoDAPICanal eLuz transmitida(TL)Realizarimagem celular,configuraçãoMódulos personalizados para analisar e quantificar células com base em imagens de luz transmissível e fluorescência nuclear.

No editor de módulos personalizadosconfiguraçãoTLAlgoritmo de divisão celular

A divisão celular precisa é importante para quantificar as células capturadas pela luz transmitida.paraTLCélulasDivisãoCélulas selecionadasAlgoritmosUmpodeDivisão precisaeIdentificaçãoHeLaeCHOCélulas （Gráfico 2). Há outras configurações disponíveis. CélulasAlgoritmosO Bou célulasAlgoritmosO CpodePor separadoPara análise de células pequenas ou grandes- É.Na análiseno móduloConfiguração possívelFiltrar a área totalMenos que150 pM2Células (imagem) 3). istouma configuraçãopodeaCertifique-se de evitar as pequenas células mortas que serão cercadasComoAs células vivas são contadas e analisadas.Além disso,Células definidasAlgoritmos de contagem nuclear podemaExatamenteQuantificaçãoHeLaeCHOdoNúcleo celular (imagem) 4).

CombinaçãoContagem de células e núcleos fluorescentes sob luz transmitida

UtilizaçãoTLAlgoritmo de divisão celularconfiguraçãoMódulos personalizados podem ser divididos com precisãoHeLaeCHOCélulas (imagem) 6）- É.Não houve diferença estatística entre a contagem total de células e a contagem de núcleos na luz transmitida,MostrarTLA precisão do algoritmo de divisão celular (Figura) 7). Além da contagem de células,TLAlgoritmos de divisão celular também podem gerar váriosDadosAvaliação das respostas celulares eCélulasCaracterísticas da forma (Figura) 5). Por exemplo, pode produzir células e célulasObjecto alvoContagem total e média, área, força, forma, altura、Largura e váriosOutrosdiferentes leituras. UtilizaçãoOpções do filtroRemoção das células mortas ao redorOtimizaçãoEsteprocesso e reduzirMenosA necessidade de coloração de células vivas ou células inteiras. Além disso, a coloração e contagem do núcleo celularCélulasVerificaçãoElefantesO uso de algoritmos demonstra que a imagem de luz transmissível pode ser analisada- É.

Gráfico 2. SeráTLO algoritmo de divisão celular é aplicado ao selecionadoHeLaAs células transmitem imagens de luz.No editor de módulos personalizados, você podeaAtravésconfiguraçãoEscolha o comprimento de onda fonte e par de tipo de célula representativoTLAlgoritmos de divisão celular são configurados. CélulasAlgoritmosUmpodeaEfetivamenteReconhecer imagensdoHeLaeCHOCélulas.

Gráfico3. TLSuperposição de divisão celular eApós a filtragem das configurações do filtroImagens comparativas sobrepostas. Faça a área mínimaConfigurar como150 μm2aFiltrar.死Células- É.

Gráfico 4. UtilizaçãoVerificação celularElefantesDivisãomódulo paraImagem do núcleo de células fluorescentesRealizarContar.Quantificar as células de acordo com o nucleo celular,fazerusarHoechst 33342Para o núcleo celularRealizarColoração. Otimizar as avaliações mínimas e máximas de largura e intensidade que excedem os parâmetros de fundo locais para precisãoIdentificaçãoTodosFinoNúcleo celular.FinoNucleos azuis (esquerda), análiseOcultamentoAmarelo (à direita).

Gráfico5. O HeLaimagem representativa das células,configuraçãoAnálise de imagem de módulo personalizadoMétodo- É. azulOcultamentoOs representantes aprovaramTLUso de algoritmos de divisão celularTLFiltroCubrirFiltração ocultaCélulas descobertas, o amarelo representa a verificação pela contagemElefantesAlgoritmos descobriram o núcleo celular. As medições necessárias para o módulo personalizado podem ser realizadas na guia Mediçõesconfiguração- É.NecessidadeO objeto a ser determinado éDefiniçãoparapodeAtravésTLDivisão celularAlgoritmosPara esconder os objetos, selecione a verificação de contagemElefantesCubrirEncerradoDeterminar cada umObjecto alvocaracterísticas.

Gráfico6. O HeLaeCHOimagens das células eAplicaçõesTLMódulo personalizado de divisão celularApós a otimizaçãoAnálise de imagensresultado- É.DAPINúcleo celular em azul(à esquerda)，Em imagensAnálisemédioMáscaraPara Amarelo(Direita)transmitindo as células da luz paraMáscara azul claro. Aprovação10x plano de flúorObjetivos emImageXpressMicroCapturar imagens no sistema e usar o novoTLO módulo personalizado configurado com o algoritmo de divisão celular analisa as imagens.

Gráfico 7. baseadoTLDivisão celular e nucleotismoNúmero de objetosComparação de módulosHeLaeCHOContagem total de células. Pressione1：2Proporção de diluição das células a partir de cada buraco20，000A concentração de uma célula começa.

conclusão

MetaXpressEditor de módulos personalizadosTLAlgoritmos de divisão celular podemaQuantificar e analisar eficazmente vários tipos e tamanhos de células.ImageXpress®Micro ConfocalO sistema de análise de imagem de alta connotação cofocal de disco giratório suporta a função de segmentação otimizada para análise independente do fluorescenteCélulasMorfologia. Quantificar células usando imagens de luz transmissívelpodeTornar a capacidade de teste dos pesquisadores mais flexível. EsteDescrição da aplicaçãoO método descrito apareceTLAlgoritmos de divisão celular podem ser usados ​​em uma variedade de testes, incluindo, mas não limitado a, proliferação, estudos de citotoxicidade e transfecção.