Controle positivo em teste de citotoxicidade in vitro

corpoControle positivo no ensaio de toxicidade extracelularporInstituto de Pesquisa Hatano (HRI)Pesquisa Produção，Amplamente utilizado em experimentos de citotoxicidade in vitro, pode satisfazer a farmacêutica chinesa-métodos de teste de citotoxicidade,ISO 10993eYBB 00012003Requisitos de parâmetros do método de teste de citotoxicidade.

Controle positivo em teste de citotoxicidade in vitroEmbarcação com meios convencionais. O método de imersão é o seguinte: operação estéril, tomar1 grControle positivo em teste de citotoxicidade in vitroPosicionado em15 mlNo tubo centrífugo estéril, de acordo com3 ml / gproporção de imersão adicionar o meio de imersão, colocação horizontal oscilação,120rpm，37Submersão em condições de ℃24 horasApós a mergulha, misture-a para cima e para baixo.10Em segundo lugar, extrair o líquido para o teste. Immergir o meio usado como um controle em branco. Atenção aos meios de cultura bem preparados4Armazenar a temperatura não superior a duas semanas. Teste de citotoxicidade in vitroMTTMetodo de teste: tomar em bom estadoL929Células, centrifugação digestiva, preparação em suspensão celular, vacinação em96Placa de cultivo de buracos. Estabeleça vários poros em cada grupo, cada poro é vacinado100µLSuspensão celular, colocado37℃、5%de dióxido de carbono.CO2Cultivo de caixa24 horas. Eliminar o meio original e adicionar100µLlíquido de imersão, líquido de controle vazio,CO2A caixa continua a ser cultivada.24 horasDepois, observar a forma celular sob o microscópio. Elimine o líquido dentro dos buracos e adicione a cada buraco.50µL1mg/mLestérilMTTSolução (MTTusarMEMConfiguração de mídia, preparação atual, preparação de mídia não disponível), cultivo contínuo2 horasDepois de descartar o líquido no buraco, adicionar100µLIsopropanol, oscilante misturado, em570 nme650nmDetermine a absorção ao comprimento de onda para calcular a sobrevivência celular.

O ensaio de citotoxicidade é a utilização de métodos de cultura celular in vitro para avaliar a potencial citotoxicidade de materiais biológicos e dispositivos médicos ou immersões, é um dos principais indicadores de medição no sistema de avaliação biológica de materiais biológicos e é um projeto em que dispositivos médicos e materiais biológicos devem ser testados para quase todos os usos. Testes de citotoxicidade podem testar os efeitos dos biomateriais sobre a função metabólica celular a curto prazo, permitindo a triagem rápida de materiais potencialmente citotoxicos.

Teste de citotoxicidade como um meio de detecção de toxicidade de materiais biológicos, com as vantagens de facilidade, alta sensibilidade, baixo custo, curto ciclo de teste e outros, é amplamente utilizado para a detecção e avaliação de biocompatibilidade de materiais biológicos e produtos de dispositivos médicos. O método de avaliação da citotoxicidade de materiais biológicos passa da observação das mudanças morfológicas e quantitativas das células para a avaliação da adesão, proliferação e metabolismo das células, com o número de células dinâmicas e a capacidade de proliferação celular como método de avaliação para avaliar a biocompatibilidade das células de materiais biológicos. Os testes específicos incluem o teste de ingestão de vermelho neutro, o teste de formação de clones,MTTEnsaios de citotoxicidade eXTTEnsaios de citotoxicidade, comoMTTeXTTOs métodos de ensaio de citotoxicidade, devido à quantificação da citotoxicidade do material, são mais aceitos e mais amplamente aplicados.

MTTeXTTPrincípio de teste de citotoxicidade para a deshidrogenase de ácido âmbar em mitocondrias de células vivas pode tornar exogênicaMTTReduzido em insolúvel em água azul-roxo(Formazano)Depositado nas células, as células mortas não têm essa função. Dimetilo(DMSO)Ou isopropanol ou sulfato de metilo de fenazina(PMS)É capaz de dissolver a cristalização de alforio em células, usando o marcador enzimático em570 nmSeu valor de absorção de luz é medido no comprimento de onda, e dentro de um certo número de células, a quantidade de cristalização é proporcional ao número de células. De acordo com o valor de absorção medido(OD)valor)para determinar o número de células vivas,ODQuanto maior o valor, maior a atividade celular e menor a toxicidade. Ao calcular a taxa de proliferação das células, a citotoxicidade dos materiais médicos e seus produtos pode ser avaliada em graus quantitativos. A sobrevivência das células também pode ser calculada em caso de diluição por meio de diferentes concentrações de líquido de imersãoIC50(Inibição da atividade celular50% de concentração)Avaliação da citotoxicidade dos materiais biológicos e seus produtos.

Controle positivo em teste de citotoxicidade in vitroBoa reprodutividade em lote, estável desempenho e características ricas em tamanho especificado, que podem ser usadas como avaliação biológica de dispositivos médicos-Material ideal para medição de citotoxicidade.