AKR (células cancerosas do esôfago do rato)

AKR (células cancerosas do esôfago do rato)

Tratamento após a recepção das células

1) Depois de receber as células, a parede da garrafa de desinfecção de 75% de álcool coloca a garrafa T25 a temperatura ambiente para colocar cerca de 1 hora, se a garrafa de cultura for descoberta danificada, derramamento de líquido e poluição das células, por favor, entre em contato conosco imediatamente após tirar uma foto.

2) Por favor, confirme o estado da célula sob o microscópio 4 ou 5X, ao mesmo tempo tirar 2-3 fotos das células recém-recebidas (10 x, 20 x) e uma foto da aparência da garrafa de cultivo para retenção, como base para o estado da célula no momento do recebimento após a venda.

3) Células de parede:As células são colocadas a temperatura ambiente por 1h, sob o microscópio para observar o crescimento das células e a situação de adesão, algumas células adesivas durante o transporte rápido podem cair devido à vibração e se agrupar após a queda.Se a densidade de crescimento das células observadas sob o espelho for inferior a 60%, o meio de irrigação pode ser removido da garrafa (se as células não pegadas precisarem de reciclagem centrífuga, ressuspender na garrafa original), adicionar a nova formulação de meio de cultura completo de 6-8 mL e colocar na caixa de cultura celular para continuar a cultura. Se a densidade de crescimento celular for superior a 70% a 80%, a transferência celular pode ser realizada. Durante a transmissão, as células que caíram devido à vibração de transporte precisam ser recuperadas por centrifugação.

4) Método de operação de extração durante o transporte celular: coletar as células extraídas após a centrifugação, limpar novamente com PBS, centrifugar, adicionar 1 ml de enzima no tubo de centrifugação para dispersar a digestão por cerca de 20 segundos, adicionar todo o meio de cultura para terminar a digestão após a centrifugação, o restante das células adesivas são operadas de acordo com o método normal de transmissão de células adesivas.

5) Nota: o meio de cultura para transporte (meio de irrigação) não pode mais ser usado para cultivar células, por favor, substitua o novo meio de cultura completo para cultivar células de acordo com as condições de cultura celular do manual. A primeira transmissão após a recepção das células sugere a transmissão de garrafas de cultura T25 1: 2.

Operação de cultura celular

1) Recuperação de células: o tratamento de congelamento de cultura celular abaixo é apenas para referência, as etapas operacionais específicas são baseadas nas instruções do produto fornecido

O tubo de congelamento contendo 1 ml de suspensão celular é agitado rapidamente para descongelar em banho de água a 37 ° C, adicionando 4 ml de meio de cultura para misturar uniformemente. Centrifuge a 1.000 rpm por 3 min, descarte o líquido de supernatação e acrescente 1-2 ml de meio de cultura depois de soprar bem. Em seguida, todas as suspensões celulares são adicionadas a uma garrafa com uma quantidade moderada de meio para a cultura durante a noite (ou a suspensão celular é adicionada a um prato de 6 cm para adicionar cerca de 4 ml de meio completo para a cultura durante a noite). No terceiro dia, troce o líquido e verifique a densidade celular.

2) Transferência celular: se a densidade celular chegar a 80% -90%, a cultura de transmissão pode ser realizada.

a) Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

b) Adicione 1 ml de líquido digestivo (0,25% Trypsin-0,02 TA) na garrafa de cultura, para que o líquido digestivo penetre todas as células, coloque a garrafa de cultura em uma caixa de cultura de 37 ° C para digerir 1 -3 min (dependendo da digestão celular), em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e desmontar, rapidamente recuperar a mesa de operação, bater alguns toques na garrafa de cultura depois de adicionar 2-3 ml para jogar com todo o meio de cultura para terminar a digestão.

c) Subir suavemente no tubo de centrifugação estéril, centrifugar por 1000 rpm por 5 min, descartar o líquido, adicionar 1-2 ml de líquido de cultura e soprar bem.

d) Divida a suspensão celular em proporção 1: 2 em um novo prato ou garrafa com 8 ml de meio de cultura e coloque-a em uma caixa de cultura.

Pontos de atenção para a transmissão celular:

É necessário lavar o PBS novamente.

As células são observadas várias vezes para dominar o tempo, não para terminar a digestão sem a queda básica das células e depois soprar para baixo, de modo que as células são mais fáceis de diferenciar e morrer.

Não bater continuamente nas células.

3) Congelação celular: quando as células estão em bom estado de crescimento, as células podem ser congeladas. A garrafa T25 abaixo é um exemplo;

a) Coletar células e líquido de cultura celular, carregar em um tubo de centrifugação estéril, centrifugar a 1000 rpm em 4 min, descartar o líquido superior, limpar novamente com PBS, descartar o PBS, realizar a contagem de células.

b) de acordo com o número de células adicionar o líquido de congelamento de células sem soro, para que a densidade celular 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 10 ^ 7 / mL, misturar suavemente, cada tubo de congelamento congelar 1mL de suspensão celular, atenção ao tubo de congelamento para marcação.

c) Coloque o tubo de congelamento em um frigorífico de -80 ° C e depois de 24 h transferir para o armazenamento de irrigação de nitrogênio líquido. Registre a localização do tubo de congelamento para a próxima coleta.

IV. Desenvolver atenção

1) Problemas com as células

a) Diversos problemas encontrados durante o transporte de células, perda de células, ruptura do corpo da garrafa, vazamento grave de líquido de cultura, etc.;

b) Problemas de poluição celular, envie-nos os resultados reais do experimento dentro de 3 dias após a recepção do produto e reenvie após a verificação;

c) A grande maioria das células não sobreviveram após 2 horas de reposição em temperatura normal e 2 dias após a recuperação das células congeladas em gelo seco (fotos reais e claras do estado das células devem ser fornecidas).

d) Gelo seco congelado enviado após 2 dias após a recuperação celular ou a entrega de células em reposição a temperatura normal por 2 horas e não aberto, a presença de contaminação, repetição;

e) Problemas de atividade celular, envie-nos os resultados reais do experimento no prazo de 7 dias após o recebimento do produto, identifique a vitalidade celular com a cromatização azul de Tapan e envie fotos celulares diárias após verificação;

f) As células são recebidas no dia e no dia 2,3, por favor, tire uma foto, 3 dias sem notificação, o produto é considerado qualificado. Problemas dentro de 4-7 dias devem ser fornecidos 3 dias antes do recebimento da foto da célula e a foto do problema da célula e as etapas detalhadas da operação relacionada com a célula, e se comunicar com o técnico, o técnico julgará que a nossa responsabilidade é reenviar.

2) Problemas com as células que não podem ser repetidos

a) Contaminação celular causada pela operação do cliente, sem repetição;

b) erros graves de operação do cliente causam mau estado da célula e não são repetidos;

c) O estado celular não é bom devido ao sistema de cultura celular que recomendamos e não é repetido;

d) O estado celular é ruim, não fornecer imagens claras e verdadeiras do estado celular 3 dias antes da cultura, não re-envio;

e) Quando a cultura celular é tratada de outra forma e causa problemas celulares, não se repetir;

f) Se o recebimento da célula e a descoberta de problemas de comunicação com o pessoal de atendimento ao cliente demonstrar o tempo superior a 7 dias, não se reenviar;

g) Dependendo das circunstâncias específicas.

V. Atenção

Todas as células animais são consideradas potencialmente biológicamente perigosas e devem ser operadas dentro de um banco de biossegurança de nível secundário, com cuidado, todos os resíduos e utensílios que entraram em contato com a célula devem ser esterilizados antes de serem descartados.

Recomenda-se sempre usar luvas de proteção, roupas e máscaras de proteção durante a recuperação de células congeladas. Observação: O tubo de congelamento submerso em nitrogênio líquido vai vazar e vai lentamente encher o nitrogênio líquido. Quando descongelado, a fase de conversão de nitrogênio líquido em gás pode fazer com que o recipiente exploda ou sopra a tampa com força perigosa, gerando detritos volantes que causam danos pessoais.

A célula é apenas para uso científico! As instruções são apenas para referência com base no manual de chegada real!