Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença do Tinto do Ciclovírus Porco Tipo 1

Vírus círculo suínoKit de fluorescência quantitativa de PCR tipo 1
Circovírus suíno 1 (PCV-1)

Produtos e características:
Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença do Tinto do Ciclovírus Porco Tipo 1Tem as seguintes características:

O usuário só precisa fornecer uma amostra de vírus.

Protagonistas exclusivos projetados de acordo com a sequência conservadora do tipo 1 de tintura do vírus do círculo suíno, sem reação cruzada com o vírus relacionado.

A sensibilidade pode atingir centenas de cópias/reações.

Detecção de PCR quantitativa de fluorescência de um tubo para evitar a poluição subsequente.

Este kit é suficiente para 50 PCR fluorescente quantitativa de 20 μL sistema de reação.

Este produto é apenas para pesquisa científica e não pode ser usado para diagnóstico clínico.

Transporte e conservação： Transporte a baixa temperatura,-20 ° C, válido por um ano。

Reagentes próprios： Modelo de DNA, 10 x ROX (dependendo do modelo, veja o método de uso).

Uso Um,DiluçãoControle positivo por PCR(com10E2-10E7 cópias / μL desses 6 10 vezes diluição por exemplo)

Observação: Como a concentração do produto padrão é muito alta, as seguintes operações de diluição devem ser realizadas em áreas separadas e nunca podem contaminar a amostra ou outros componentes deste kit). Para aumentar a estabilidade do produto e evitar a propagação de patógenos infecciosos, este produto não fornece amostras vivas para controle positivo, apenas fragmentos de DNA que podem ser usados ​​diretamente como controle positivo.

Marce 6 tubos centrífugos, 7, 6, 5, 4, 3 e 2, respectivamente.

3. Adicione 45 μL de diluição de modelo para PCR fluorescente com a cabeça de pistola de núcleo (preferivelmente com a cabeça de pistola de núcleo, o mesmo abaixo).

Adicione 5 μL de 1 x 10E8 cópia/μL de controle positivo no tubo 7 e agite completamente durante 1 minuto para obter 1 x 10E7 cópia/μL de controle positivo. Coloque no gelo.

5. Alterar a cabeça, adicionar 5 μL de 1 x 10E7 cópia/μL de controle positivo no tubo 6 (resultado da diluição anterior), agitar completamente durante 1 minuto para obter 1 x 10E6 cópia/μL de controle positivo. Coloque no gelo.

6. Alterar a cabeça, adicionar 5 μL de 1 x 10E6 cópia/μL de controle positivo no tubo 5, agitar completamente durante 1 minuto para obter 1 x 10E5 cópia/μL de controle positivo. Coloque no gelo.

Repita a operação acima até obter um controle positivo de 6 diluições. Coloque no gelo.

II. AmostrasPreparação do DNA：

Se houver N amostras, N + 2 extrações devem ser definidas, uma das quais é PC (preparação da amostra para controle positivo),

Um é.NC (Preparação de amostras de controle negativo). O número 4 (concentração de 1 x 10E4 cópias/μL, 10 μL é equivalente a 10.000 cópias) ou o número 5 (concentração de 1 x 10E5 cópias/μL, 10 μL é equivalente a 100.000 cópias) pode ser usado como PC, juntamente com uma quantidade de água para que o volume total seja o mesmo que o volume requerido para cada preparação. A água também pode ser usada como NC. Se 200 μL de amostras forem necessárias para cada preparação, o volume de PC e NC também deve ser de 200 μL.

9. Purificação de amostras com métodos escolhidosDNA， Este kit é compatível com a maioria dos kits de captação de DNA viral no mercado. Você também pode comprar o DNAout, um vírus de tubo único da empresa, ou a versão atualizada do DNAout, um vírus de coluna. Este kit de teste oferece 15 DNAout de vírus em um tubo gratuitamente。

III. ConfiguraçãoReação qPCR (sistema de 20 μL, realizada na sala de preparação da amostra):

10. Se apenas1 repetição, marcar N + 9 tubos de PCR, dos quais N + 2 para N + 2 obtidos anteriormente

amostras,1 para controle negativo por PCR e 6 para controle positivo por PCR. Se você fizer 2-3 repetições, o número de configurações de resposta aumenta 2 ou 3 vezes.

11. Pressione a tabela abaixo para adicionar os componentes no tubo de marcação (esta tabela lista apenas uma repetição. O controle positivo é definido após a configuração do tubo de amostra e do controle negativo, e a amostra de controle positivo é adicionada até que todas as tampas do tubo estejam armazenadas):

NotaApenas os instrumentos ABI7500, 7700 e 7900 requerem ROX como controle, outros instrumentos de PCR fluorescente (como iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 e LightCycler480) não é necessário usar ROX, então substitua-o com água.

Depois de cobrir a tampa, faça a PCR de acordo com os parâmetros abaixo (os parâmetros específicos da PCR podem ser otimizados de acordo com o instrumento).

13. Coleta de dados

As operações específicas são realizadas de acordo com o processo recomendado pelo instrumento utilizado. Os corantes fluorescentes contidos neste produto não se ligamO espectro máximo de absorção é de 471 nm quando o DNA é combinado, o espectro máximo de absorção é de 500 nm quando o DNA é combinado e o espectro máximo de emissão é de 530 nm. A captação de sinal pode ser configurada em etapas múltiplas ou estendidas.

Tratamento de dados:

Se este kit for usado para testes quantitativos, a curva padrão será desenhada com o valor log da concentração de controle positivo como eixo horizontal e o valor Ct como eixo vertical. O valor log da concentração de DNA da amostra é calculado a partir da curva padrão para o valor Ct da amostra.

Se esta caixa for usada para testes qualitativos e somente for considerada positiva ou negativa, a Ct do controle negativo deve ser maior ou igual a 40. Os controles positivos devem ter um aumento logarístico de fluorescência, com uma curva típica de amplificação e valores de Ct devem ser menores ou iguais a 30. As amostras tratadas são negativas se a Ct for maior ou igual a 40 e positivas se forem menores ou iguais a 35. Se estiver entre 35 e 40, repita uma vez. O valor de Ct do experimento repetido é negativo se for maior ou igual a 40 e positivo se for menor que 40.

Apenas para uso científico e não para ensaios clínicos ou uso terapêutico.