Kit de ELISA do fator de crescimento das células endoteliais vasculares bovinas (VEGF)

Kit de ELISA do fator de crescimento das células endoteliais vasculares bovinas (VEGF)

Condições de conservação e prazo de validade

Conservação da caixa: 2-8 ° C.

2. Período de validade: 6 meses

Princípios experimentais

Este kit de teste determinou os níveis de fator de crescimento de células endoteliais vasculares bovinas (VEGF) em espécimes usando a centrifugação bicorpal. O anticorpo do fator de crescimento de células endoteliais vasculares bovinas (VEGF) purificado é embalado em placas de microporos para formar anticorpos de fase sólida, adicionando o fator de crescimento de células endoteliais vasculares (VEGF) aos microporos embalados, em seguida, ligando-se ao anticorpo do fator de crescimento de células endoteliais vasculares (VEGF) marcado com HRP para formar um complexo de anticorpos marcados por anticorpos-antígenos-enzimas, e depois de uma lavagem completa, o substrato é colorido com TMB. O TMB é transformado em azul sob a catalisação da enzima HRP e em amarelo final sob a ação do ácido. A clareza da cor foi positivamente associada ao fator de crescimento de células endoteliais vasculares (VEGF) na amostra. Medir a absorção (OD) a um comprimento de onda de 450 nm com um calibre enzimático para calcular a concentração do fator de crescimento endotelial vascular bovino (VEGF) em amostras por meio de curvas padrão.

Composição do Kit

130 vezes o líquido de lavagem concentrado20 ml x 1 garrafa7Liquido de terminação6 ml x 1 garrafa

2Reagentes enzimáticos6 ml x 1 garrafa8Produto padrão (3200pg/ml)0,5 ml x 1 garrafa

3Placa de embalagem enzimática12 buracos x 89Diluído padrão1,5 ml x 1 garrafa

4Liquido de diluição da amostra6 ml x 1 garrafa10Instruções1 peça

5Colorante líquido A6 ml x 1 garrafa11Filme de vedaçãoDois

6Colorante líquido B6ml x 1 / garrafa12Saco seladoUm

Passos de operação

1.Dilução do produto padrão: Este kit fornece um produto padrão original, que o usuário pode diluir em pequenos tubos de ensaio de acordo com o gráfico abaixo.

1600pg / mlPadrão 5Adicionando 150 μl de diluição padrão original

800 pg / mlPadrão 4Adiciona 150 μl de diluição padrão para o produto padrão 5 de 150 μl

400 pg / mlPadrão 3Adiciona 150 μl de diluição padrão para o produto padrão 4 de 150 μl

200 pg / mlProduto padrão 2Adiciona 150 μl de diluição padrão para o produto padrão 3 de 150 μl

100pg / mlProduto padrão 1Adicionando diluição padrão de 150 μl para o produto padrão 2 de 150 μl

2.Amostragem: configurar um buraco em branco (buraco de controle em branco sem amostras e reagentes enzimáticos padrão, as operações restantes são as mesmas), um buraco padrão e um buraco de amostra a ser testado. No pacote enzimático, o padrão na placa é amostrado com precisão de 50 μl, e 40 μl de diluição da amostra é adicionado primeiro ao orifício da amostra a ser testada e, em seguida, 10 μl da amostra a ser testada (a diluição final da amostra é de 5 vezes). Coloque a amostra no fundo do orificio da placa de marcação enzimática, tente não tocar a parede do orificio e agite suavemente.

3.Criação a temperatura: usar a placa de membrana de vedação após 37 ° C durante 30 minutos.

4.Distribuição: diluir o líquido de lavagem concentrado 30 vezes com água destilada 30 vezes

5.Lavagem: remover cuidadosamente a membrana de vedação, descartar o líquido, secar, encher cada buraco com o líquido de lavagem, deixar em reposo 30 segundos depois de descartar, assim repetir 5 vezes e secar.

6.Adição de enzimas: Adicione 50 μl de reagente marcador enzimático a cada poço, exceto os poços em branco.

7.Criação: operação 3.

8.Lavagem: operar com 5.

9.Coloração: Adicione primeiro o colorante A50 μl a cada buraco, depois adicione o colorante B50 μl, misture suavemente e abale, mantenha a cor à luz por 10 minutos a 37 ℃.

10.Terminação: adicionar 50 μl de líquido de terminação por orifício para terminar a reação (neste momento, o azul vira para amarelo).

11.Medição: medir a absorção (OD) de cada orifício em sequência com um comprimento de onda de 450 nm em um orifício em branco. A determinação deve ser feita no prazo de 15 minutos após a adição do terminal.

cálculo

Leve a concentração do objeto padrão como coordenada horizontal, o valor do OD como coordenada longitudinal, desenhe uma curva padrão no papel de coordenadas, de acordo com o valor do OD da amostra para determinar a concentração correspondente pela curva padrão; multiplicar por múltiplos de diluição; Ou usar a concentração do objeto padrão e o valor do OD para calcular a equação de regressão linear da curva padrão, substituir o valor do OD da amostra pela equação, calcular a concentração da amostra e multiplicar pelo múltiplo de diluição, ou seja, a concentração real da amostra.

Precauções

A caixa de ensaio deve ser retirada do ambiente refrigerado após o equilíbrio de temperatura ambiente de 15 a 30 minutos, o pacote de marcação enzimática deve ser armazenado no saco selado após a abertura da placa.

O líquido de lavagem concentrado pode ser cristalizado, diluído pode ser aquecido no banho de água, e a lavagem não afeta o resultado.

Cada etapa de amostragem deve usar um amostrador e regularmente corrigir sua precisão para evitar erros de teste. O tempo de amostragem é melhor controlado dentro de 5 minutos, se o número de amostras for grande, recomenda-se o uso de uma pistola.

Por favor, faça a curva padrão ao mesmo tempo em cada medição, é melhor fazer um buraco composto. Se o conteúdo de substância a medir na amostra for muito alto (o valor de OD da amostra é maior do que o valor de OD do primeiro orifício padrão), dilua primeiro um determinado múltiplo (n vezes) com a diluição da amostra e depois medir, no cálculo, por fim, multiplique o múltiplo de diluição total (×n×5).

A membrana de vedação é limitada a um uso único para evitar a poluição cruzada.

Por favor, guarde o substrato à luz.

De acordo estritamente com as instruções de operação, os resultados do ensaio devem ser determinados com base nas leituras enzimáticas.

Todas as amostras, líquidos de lavagem e vários resíduos devem ser tratados como infecciosos.

9．Kit de ELISA do fator de crescimento das células endoteliais vasculares bovinas (VEGF)Componentes diferentes não podem ser misturados.