Células sensíveis DH5 alpir*

Células sensíveis DH5 alpir*

Nome do produto: DH5alpir Chemically Competent Cell
Número do produto: G6018-10 (10 100ul), G6018-100 (100 100ul)
Especificações / Introdução: G6018-10 (10 100ul), G6018-100 (100 100ul)

Genótipo

F-φ80 lac Z△M15△(lacZYA- -arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk-, mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

Breve descrição.

A cepa CLBio DH5a-in-pir, derivada do DH5a, introduziu o LAMpir no genoma de E. coli DH5a, ou seja, DH5a-in-pir, que pode expressar a proteína PIR, permitindo que os plasmídeos que contêm o replicador R6Kg ori possam ser replicados normalmente nele. DH5a na cepa pir perde a endocesase de ácido nucleico (endA), melhorando a produção e qualidade do DNA plasmódico; O tipo defeituoso da recombinase (recA) reduz a probabilidade de recombinação homógena do segmento inserido, garantindo a estabilidade do DNA inserido; A presença de lacZOM15 torna o DH5a disponível para triagem de manchas azuis e brancas; No entanto, o crescimento do DH5a na cepa pir é mais lento e o tempo de crescimento deve ser prolongado durante a cultura de comprimidos ou agitação líquida. As células sensíveis CLBio DH5a λpir são produzidas por um processo especial, com a eficiência de conversão do plasmódio pUC19 detectado > 1X109 cfu / μg de DNA.

Instruções de funcionamento:

As células sensíveis DH5a λpir são extraídas a partir de -80 ° C, inseridas rapidamente no gelo, depois de 5 minutos para que as bactérias derretam, adicionar o DNA de destino (plasmido ou produto de conexão) e misturar com a mão no fundo do tubo EP e deixar no gelo por 25 minutos.

2.42 * C banho de água quente por 45 segundos, rapidamente colocar de volta o gelo. Deixe em posição por 2 minutos e a agitação diminuirá a eficiência da conversão.

Adicione 700 μl de meio estéril LB sem antibióticos ao tubo centrífugo e misture a 37 ° C, 200 rpm durante 70 minutos.

5.000 rpm centrífuga por 1 minuto para recolher a bactéria, deixar cerca de 100 μl suavemente soprar sobre a bactéria pesada e revestir sobre o meio LB contendo os antibióticos correspondentes.

Coloque o comprimido invertido no cultivo a 37°C por pelo menos 18 horas.

Atenção：

1- Células sensíveisRecomendaçõesderrete lentamente no gelo. Inserir o DNA alvo dentro de 8 minutos no gelo, não deve ser colocado no gelo por muito tempo, armazenamento prolongado diminuirá a eficiência da conversão.

A cepa DH5aλpir cresce lentamente e deve prolongar o tempo de crescimento (37 ° C, mais de 18 horas) quando cultivada em comprimidos ou agitada líquida.

A conversão de alta concentração de plasmídeos ou produtos de conexão de alta eficiência pode reduzir a quantidade de bactérios usados ​​em placas de revestimento.

Células sensíveis DH5 alpir*