Células sensíveis DH5a

Células sensíveis DH5a

Nome do produto: DH5a Chemically Competent Cell

Código do produto: G6016

Condições de conservação: -80°C

Número, quantidade, especificações: G6016-20 (20 unidades 100u1), G6016-100 (100 unidades 100u1) |

pUC19 (vetor de controle) 10pg/ μ1; 10μ 1

Genótipo

F-φ80 lac Z△M15△(lacZYA-arg F) U169 endAl recAl

hsdR17 (rk-, mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

Instruções de operação.

1. O CLBioCélulas sensíveis DH5aColoque-o derretido no gelo (ou solte a mão ou a temperatura ambiente por um momento, até que a bactéria seja inserida rapidamente no gelo quando estiver misturada com água gelada), adicione o DNA de destino (plásmido ou produto de conexão) e bate com a mãoO fundo do tubo EP é misturado suavemente e deixado no gelo por 25 minutos.

O banho de água de 2,42 ° C é aquecido por 45 segundos, colocado rapidamente de volta no gelo e deixado em reposo por 2 minutos.

Adicionar 700 μ1 de meio estéril (2YT ou LB) sem antibióticos ao tubo centrífugo após mistura a 37 ° C, 200 rpm para recuperação por 60 minutos.

4.5000rpm centrífuga por um minuto para recolher bactérias, deixe soprar suavemente sobre cerca de 100 μ1 e revestir sobre o meio de cultura 2YT ou LB contendo os antibióticos correspondentes.

Coloque o comprimido invertido em uma incubadora de 37 ° C durante a noite. Se for realizada uma operação de triagem de manchas azuis e brancas, coloque o comprimido em cultura a 37 ° C por pelo menos 17 h.

Atenção

Células sensíveis CLBioRecomendaçõesderrete no gelo. Coloque-o no gelo por cerca de 5 minutos para derreter e adicione o plásmido dentro de 8 minutos após o derretimento, caso contrário, afetará a eficiência da conversão.

2. deve ser usado suavemente ao misturar plasmidos ou conectar produtos.

A conversão de alta concentração de plasmídeos ou produtos de conexão de alta eficiência pode reduzir a quantidade de bactérios usados ​​em placas de revestimento.