ELISpot Pro: Detecção de IL-4 humana (ALP)

ELISpot Pro: Detecção de IL-4 humana (ALP)

Principios experimentais do MABTECH ELISPOT

O experimento ELISPOT usou uma placa de 96 orifícios baseada em membrana PVDF (cat: MSIPS 4510, Millipore), embalada com anticorpos monoclonais específicos (requer anticorpos não tóxicos, sem endotoxinas e de alta afinidade) para capturar a secreção celular de citoquinas.

Em seguida, as células e os estímulos antígenos a serem detectados são adicionados nos orifícios da placa para a cultura. Sob estimulação do estímulo, as células T secretam as citocinas correspondentes no período de tempo correspondente. Neste momento, as citocinas são capturadas por anticorpos envolvidos na membrana.

Depois de lavar as células, as citocinas capturadas podem se ligar ao segundo anticorpo marcado com biotina e, em seguida, ligar-se à biotina com afinina enzimática para a coloração química enzimática, que pode formar uma mancha circular na parte da membrana (é claro, também pode ser usado o segundo anticorpo marcado com fluorescência, evitando o método de coloração química subsequente, e pode detectar várias citocinas de uma vez), cada mancha corresponde a uma célula que secretou a citocina.

A quantidade estatística de manchas na membrana, dividida pelo número total de células adicionadas no orifício, pode calcular a percentagem de células positivas.

MABTECHEsta tecnologia tem as seguintes três vantagens:

1: Alta sensibilidade. Só uma célula em um milhão de células pode ser detectada, o que representa um aumento de duas a três ordens de quantidade em relação aos métodos ELISA tradicionais.

2: Nível de célula única, detecção da função de células vivas. O ELISPOT é uma estimulação direta das células ativas com antígenos que detecta a função das células vivas.

Terceiro: operação econômica fácil, filtragem de alto fluxo. O ELISPOT não tem um processo complexo de amplificação celular in vitro, não usa isótopos e é operado de acordo com uma experiência padronizada, com a qual um experimentador pode processar centenas de amostras ao mesmo tempo com eficiência muito maior do que outros métodos de detecção.

ELISpot Pro: Detecção de IL-4 humana (ALP)

MABTECH: 3420-2APW-2 inclui:

Placas pré-revestidas, mAb IL4-I(2 placas brancas) Detecção mAb: IL4-II, ALP(150 μl)

Substrato BCIP/NBT-mais (25ml)

Controle positivo: Anti-CD3mAb (CD3-2) (100 μl)

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