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Mídio específico para células INS-1

NegociávelAtualização em06/11

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Natureza do fabricante: Produtores

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Detalhes do produto

Propriedades do produto:

Nome do produto	especificação	Forma do produto
Mídio específico para células INS-1	125ml × 4	líquido

Detalhes do produto:

Cuidadosamente otimizado pela equipe técnica, após testes a longo prazo, este produto pode manterO melhor estado de crescimento das células INS-1. Este produto já contém vários ingredientes necessários para o crescimento de células INS-1 e pode ser usado diretamente para a cultura in vitro de células INS-1 sem a adição de ingredientes. Este produto é somente para uso científico adicional e não deve ser usado para diagnóstico, tratamento, uso clínico, doméstico ou outros fins.

Descrição do produto

Forma do produto: líquido

Concentração do produto:1×

Especificações do produto: 125ml × 4

Componente do meio de cultivoRPMI-1640 + 10% FBS + 50μmol / L β-mercaptoetanol + 1% P / S

Teste de bactériasNegativo:

Detecção de fungosNegativo:

Detecção de BrancosNegativo:

Experimento de crescimento celularCélulas crescem bem e formam-se normalmente

Conteúdo de endotoxinas(UE/mL): ≤3

Condições de armazenamento2 ~ 8 ° C, armazenamento à luz

Condições de transporteTransporte refrigerado de sacos de gelo

validade3 meses

Relatório experimental:

Separação e cultivo:

Identificação de imunofluorescência:

1, sob condições estériles, remova o tecido atrial de ratos SD de idade 1-3d e, em seguida, use PBS para limpar este bloco de tecido duas vezes, e finalmente será de aproximadamente 1 mm3 de tamanho;
2, adicionar 4 mL de digestão enzimática (0,1% e 0,1% de colágenase tipo I) ao bloco de tecido, misturar 10s, colocar a digestão em 37 ° C em 10 min, em seguida, soprar com uma goteira para fazer uma suspensão unicelular, precipitar naturalmente e coletar a limpeza, colocar em 4 ° C após a terminação da digestão com um meio que contém 10% FBS;
3, o tecido restante adicionar 3-4mL de líquido digestivo enzimático, misturar 10s, colocar 37 ° C após a digestão 10 min, de acordo com o método acima recolher a limpeza e terminar a digestão após 4 ° C colocar, repetir esta etapa 2-3 vezes até que o tecido é digerido;
4, filtre a digestão celular com uma tela de aço inoxidável de 200 meshes, centrífuga de 1200r / min para 10min, descarte a limpeza superior, as células de precipitação são misturadas com um meio de cultura que contém 10% de FBS DMEM / F12, vacinadas em garrafas de cultura de 25 cm2, colocadas em 37 ° C, 5% de CO2 em uma caixa de cultura;
5, após a diferença de adesão à parede 1h, aspirar o meio de cultura, de acordo com a necessidade experimental de vacinação na placa de 6 buracos para continuar a cultivar;

1, espera que as células do músculo atrial cresçam até 80% de fusão, descartar o meio de cultura, lavar as células com PBS de crescimento térmico 2 vezes, cada vez por 10 minutos, e, em seguida, fixar as células com poliformaldeído de 4% a temperatura ambiente por 15 minutos;
2, PBS lavar as células 2 vezes, cada vez por 10 min, em seguida, em condições de 4 ° C, com 0,1% Triton X-100 permeabilidade por 15 min;
3, PBS lavar as células 2 vezes, cada vez por 10min, em seguida, em condições de temperatura ambiente, com 4% BSA para fechar as células por 30min;
Dilue a alfa-actina em proporção de 1: 100 e coloque-a no frigorífico de 4 ° C para incubar as células durante a noite;
5, PBS lavar as células 3 vezes, 10min cada vez, diluir a resistência anti-alfa-actina em proporção de 1: 150, colocar 1h em condições de 37 ° C;
Lave com PBS 3 vezes, cada vez por 10 minutos, e finalmente observe a imagem sob o microscópio fluorescente invertido e tire uma foto.

Procedimentos operacionais:
Preparação de meios de cultivo e condições de congelamento:
1) Preparar o meio RPMI-1640, 90%; Sério bovino de alta qualidade, 10%.
2) Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2, 5%. Temperatura: 37 ° C, umidade da bacia de cultivo de 70% -80%.
3) Liquido congelado: 90% soro, 10% DMSO, disponível atualmente, armazenamento de nitrogênio líquido.
Tratamento celular:
1) Células de recuperação: coloque rapidamente o tubo de congelamento contendo 1 ml de suspensão celular em um banho de água de 37 ° C (a superfície da água deve estar abaixo da tampa do tubo de congelamento) e agite para descongelar, mover-se para um tubo centrífugo de 15 ml pré-preparado contendo 4 ml de meio de cultura e misturar uniformemente. Centrifugar em 1000RPM por 4 minutos, descartar o líquido e adicionar 1mL de meio para soprar bem. Em seguida, toda a suspensão celular é transferida para a cultura durante a noite em uma garrafa com meio de cultura de 5 ml. No dia seguinte, troce o líquido e verifique a densidade celular.
2) Transmissão celular: se a densidade celular chegar a 80% -90%, a cultura de transmissão pode ser realizada.
Para células suspensas, a transmissão pode ser feita com referência aos seguintes métodos:
Método 1: coletar as células.1000RPM， Centrifuge em condições de temperatura normal por 5 minutos, descarte o líquido superior, adicione 1-2 ml de cultura depois de soprar bem, dividir a suspensão celular na proporção de 1: 2 a 1: 5 em um novo prato ou garrafa com 8 ml de meio de cultura.
Os produtos da empresa são usados apenas para pesquisa científica

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