iTRAQ TMT (quantificação de marcação isotópica)

Quantificação de marcação isotópica:

iTRAQ (isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) &TMT (Tandem Mass Tags) Tecnologias quantitativas de marcação in vitro de polipéptidos desenvolvidas pela AB Sciex e Thermo, respectivamente, utilizam vários reagentes isótopos para marcar o N-terminal da proteína polipéptida ou o grupo da cadeia lateral da lisina, com reagentes de diferentes pesos moleculares para marcar amostras de diferentes fontes, permitindo assim a comparação de proteomas entre amostras diferentes.

Passos do experimento iTRAQ:

Preparação da amostra: a amostra a ser testada para o cálculo quantitativo da concentração de proteína da amostra;

2. Realquilação de proteínas e enzimólise: cada grupo de amostras toma 100 μg de acordo com os requisitos do kit iTRAQ para o tratamento, após a enzimólise com solução de panprotease de nível de sequência, o segmento enzimólise coletada por centrifugação do tubo de ultrafiltro;

3. Marcação iTRAQ: equilibrar o reagente ITRAQ a temperatura ambiente, dissolver com 150 μL de isopropanol, tomar o segmento peptídico enzimolítico para adicionar o reagente iTRAQ após a reação a temperatura ambiente de 2 h, adicionar a reação de terminação de água, misturar diferentes grupos de amostras em quantidades equivalentes, congelar a vácuo e secar a amostra:.

Análise LC-MS-MS: espectroscopia de massa em série usando o Q-Exactive Orbitrap da Thermo.

5. Processamento de dados e análise de mensagens vivas

Os resultados mostram:

todoEscritórioAnálise do mapa térmico do agrupamento

* Análise estatística do número de proteínas para 0

Ciclo experimental e critérios de entrega

1. Ciclo experimental: 4-6 semanas

Critérios de entrega: resultados quantitativos de proteínas, resultados de identificação, dados brutos do espectro de massa, resultados da análise de vida (análise G0). Análise KEGG, etc.

Informações para confirmação

1. Espécies da amostra

Tipo de amostra (tecido ou células ou sangue)

Quantidade e agrupamento das amostras

4. Requisitos de análise

Referências

XuX, Zhu Q, Zhang R, et al. Análise proteômica baseada em ITRAQ de lesão pulmonar aguda induzida pelo ácido oleico em

Ratos[J]. Fisiologia celular e bioquímica, 2017: 1949-1964.

QuZ, GaoF, LiL, et al. Análise proteômica quatitativa sem rótulo de proteínas de membrana expressas diferencialmente

de Macrófagos Alveolares Pulmonares Infetados com Síndrome Reprodutiva e Respiratória Porcina Altamente Patogênica

Vírus e sua cepa atenuada [J]. Proteômica, 2017:1700101.

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