Experiência sem rótulo (Label-free)

Experiência sem rótulo (Label-free)

Sem rótulo (Label-free)

Label-fiee: é uma técnica de proteômica diferencial não marcada que não requer marcadores isotópicos para marcar segmentos peptídicos e quantificar segmentos peptídicos ou proteínas de acordo com a força de sinal do pico de massa diretamente. Análise de segmentos de peptídeos enzimólicos sem rótulo por meio de ligação líquida classificada HPLC. Atualmente, existem dois tipos principais de técnicas de quantificação não calibradas baseadas em espectro de massa: uma é a quantificação de proteínas com base em informações como a intensidade do pico do segmento peptídico e a área do pico relacionadas com o espectro de massa de nível I, e outra é a quantificação com base em contagens espectrais de massa secundária do segmento peptídico correspondente à proteína.

Passos experimentais

1. pré-tratamento de proteínas, incluindo remoção de ácido nucleico, quantificação de purificação de proteínas, eletroferese em gel de poliacrilamina SDS;

2. corte endoenzimático de goma proteica;

Purificação de polipéptidos; .

Análise espectroscópica de massa de misturas de polipéptidos, incluindo identificação espectroscópica de massa e comparação de informações quantitativas;

5. Análise de cartas vivas

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Ciclo experimental e critérios de entrega

1. Ciclo experimental: 4-6 semanas

Critérios de entrega: resultados quantitativos de proteínas, resultados de identificação, dados brutos do espectro de massa, resultados da análise de vida (análise G0). Análise KEGG, etc.

Informações para confirmação

1. Espécies da amostra

Tipo de amostra (tecido ou células ou sangue)

Quantidade e agrupamento das amostras

4. Requisitos de análise

Referências

[1] HuS, Qiu N, Liu Y, et al. Identificação e estudo proteômico comparativo da proteína da branca de ovo de codorniza e pato usando eletroforese em gel bidimensional e espectrometrianálise de massa em tándem de desorção/ionização a laser assistida por matriz [J]. Ciência das Aves, 2016: pew033.

[2] Bouvet M, Turkieh A, Acosta-Martin A E, et al. Perfil proteômico de macrofagos por eletroforese 2D [J]. Jornal

Experimentos Visualizados, 2014(93).

Experimento em serviço: