Kit de diagnóstico de anticorpos de Leishman AB ELISA

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Kit de diagnóstico de anticorpos de Leishman AB ELISA

Guangzhou Jianlun Biotecnologia Co., Ltd.

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Kit de diagnóstico de anticorpos de Leishman AB ELISA

Princípio do teste

Experimento de imunoassorção associado a franase indireta (ELISA). As amostras com concentrações conhecidas de LSM-Ab, padrões e concentrações desconhecidas são adicionadas ao marcador de microporose para teste. Primeiro, aquecer o LSM-Ab e os anticorpos marcados simultaneamente. Após a lavagem, junte-se à família.

marcado com HRP. Depois de aquecer e lavar, remover os compostos enzimáticos não ligados e adicionar o substrato A, B e os compostos enzimáticos ao mesmo tempo.

Usar. gerar cores. A intensidade da cor é proporcional à concentração de LSM-Ab na amostra.

Materiais próprios

Água destilada.

加样器： 5ul, 10ul, 50ul, 100ul, 200, 500ul, 1000ul.

Oscilladores e agitadores magnéticos.

Segurança

Evite o contato direto com o líquido final e os substratos A e B. Depois de entrar em contacto com esses líquidos, enxague com água o mais rápido possível.

Não coma, fume ou use cosméticos durante o experimento.

Não absorva nenhum ingrediente da caixa com a boca.

Precauções operacionais

O reagente deve ser armazenado de acordo com as instruções do rótulo e restaurado a temperatura ambiente antes de ser usado. Os produtos padrão após diluição devem ser descartados e não podem ser conservados.

As placas não utilizadas no experimento devem ser imediatamente colocadas de volta no saco e seladas para evitar deterioração.

Outros reagentes não utilizados devem ser embalados ou cobertos. Não misture diferentes lotes de reagentes. Utilização antes da conservação.

Use uma cabeça de aspiração única para evitar a poluição cruzada e evite o uso de amostradores com partes metálicas ao aspirar líquidos terminais e substâncias A e B.

Configure o líquido de lavagem com um recipiente de plástico limpo. Misture completamente os ingredientes e amostras do kit antes de usar.

A placa de marcação enzimática deve ser completamente seca ao lavar, não coloque o papel de absorção de água diretamente no buraco de reação do marcador enzimático para absorver água.

O substrato A deve ser volátil para evitar a abertura da tampa por muito tempo. O substrato B é sensível à luz para evitar exposição prolongada à luz. Evite o contato com as mãos, é tóxico. Verdade

O valor de OD deve ser lido imediatamente após a conclusão do teste.

A ordem em que o reagente é adicionado deve ser consistente para garantir que todos os peros da placa de reação tenham o mesmo tempo de crescimento.

Faça a operação de aquecimento de acordo com o tempo, a quantidade e a ordem indicadas nas instruções.

Métodos de recolha, tratamento e conservação de amostras

Soro - evitar qualquer estímulo celular durante a operação. Usar tubos de ensaio sem termogênios e endotoxinas. Depois de coletar o sangue, centrifugar 1000 x g por 10 minutos

Separe o soro e os glóbulos vermelhos com rapidez e cuidado.

Plasma --- EDTA, citrato, hepatina plasma pode ser usado para a detecção. 1000 x g de centrifugação durante 30 minutos para remover as partículas.

Liquido supercelular --- 1000 x g por centrifugação durante 10 minutos para remover partículas e polímeros.

Conservação - se a amostra não for usada imediatamente, deve ser dividida em pequenas partes para ser conservada a -70 ° C para evitar o congelamento repetido. Tanto quanto possível, não use hematologia ou hipertensão.

Sangue gorduroso. Se houver grandes quantidades de partículas no soro, centrifuge ou filtre antes da detecção. Não descongelar a 37 ° C ou mais. Deve ser descongelado a temperatura ambiente e

Certifique-se de que as amostras são descongeladas uniformemente e completamente.

Preparação dos Reagentes

Produtos padrão: a diluição de série de produtos padrão deve ser preparada durante o experimento e não pode ser armazenada. Oscillar o produto padrão antes de diluir.

Dilução do tampão de lavagem (50 x): diluir 50 vezes com água destilada.

Passos de operação

Antes de usar, misture todos os reagentes. Não faça com que o líquido produza uma grande quantidade de espuma para evitar a adição de uma grande quantidade de bolhas durante a amostra, gerando erros na amostra

Poor.

Determine o número de placas necessárias com base no número de amostras a serem testadas mais o número de itens padrão. Cada padrão e buraco em branco é recomendado para fazer um buraco composto. Cada amostra de acordo com

Dependendo do seu número, você pode usar o furo para fazer o furo.

Adicione 50 ul do produto padrão diluído no buraco de reação e adicione 50 ul da amostra a ser testada no buraco de reação. Adicione imediatamente 50ul de anticorpos marcados.

Tape a placa de membrana, oscile suavemente e misture a temperatura de 37 ° C por 1 hora.

Elimine o líquido do buraco, encha cada buraco com o líquido de lavagem, oscile por 30 segundos, elimine o líquido de lavagem e seque com papel absorvente de água. Repita esta operação 3 vezes. Se usar uma máquina de lavar louça

Lavar, o número de lavagens aumenta uma vez.

Adicione 80 ul de afinidade-HRP para cada orifício, oscile suavemente e misture a 37 ° C durante 30 minutos.

Elimine o líquido do buraco, encha cada buraco com o líquido de lavagem, oscile por 30 segundos, elimine o líquido de lavagem e seque com papel absorvente de água. Repita esta operação 3 vezes. Se usar uma máquina de lavar louça

Lavar, o número de lavagens aumenta uma vez.

Adicione 50ul de substrato A e B cada um para cada orifício, oscile suavemente e misture durante 10 minutos a 37 ° C. Evite a luz.

Retire a placa enzimática e adicione rapidamente o líquido de terminação de 50 ul, o resultado deve ser medido imediatamente após a adição do líquido de terminação.

Determine o valor de OD de cada orifício a um comprimento de onda de 450 nm.

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