A GeneCopoeia dos EUA (Genes Regenerativos) fornece clones de expressão alvo com base no papel do miRNA genômico * e abrange uma base de dados pública. Clones de expressão de alvo de miRNA contêm sequências 3'-UTR (ou seja, locais de ação de miRNA) diretamente abaixo do gene de relatório impulsionado pelo promotor SV40 (fluorescenase de luciferas). O segundo relatório do gene renilla luciferase, que pode ser usado para monitorar a transfecção, expressa eficiência e pode ser referenciado internamente.
Características do clonagem de expressão de alvos de miRNA do genoma humano
Por meio da análise da atividade da fluorescenase de foguera, os resultados do miRNA podem ser obtidos sobre a regulação do gene alvo potencial. O mRNA quimérico da fluorescenase ORF e 3' UTR é formado após a transcrição da clonação de expressão. Se um miRNA específico pode se ligar complementarmente a um segmento da sequência 3'-UTR, a atividade da proteína codificada pela fluorescenase ORF na quimera também é regulada de forma correspondente. Portanto, a intensidade luminosa da fluorescenase pode ser quantificada para determinar o efeito da regulação da mRNA do alfo correspondente ao miRNA.
Aplicações de clonagem de expressão de precursores e alvos de miRNA
- Regulação da expressão genética: importação de um único ou conjunto inteiro de miRNAs em células de cultura por meio de transfecção ou infecção por partículas virales para regular a expressão de um único miRNA ou vários miRNAs em genes. Estudo sobre efeitos reguladores e funções do miRNA em condições específicas ou integração
- Confirmação e identificação de genes alvo de miRNA: utilização de clonagem de expressão de validação de alvo de miRNA para triagem e identificação de genes alvo de papel de miRNA em grande escala. Um miRNA pode atuar em todos os genes alvo, e todos os miRNAs que podem atuar em um mRNA 3'-UTR