Kit de meios de cultivo de câncer de órgãos intrabiliares de base biológica

Kit organoide de colangiocarcinoma intrahepático humano

Conjunto de meios de cultura de câncer de órgãos intrabiliares do fígado humano

1、 Descrição do produto

Kit de meios de cultura de câncer de órgãos intrabiliares do fígado humano (Kit organoide de colangiocarcinoma intrahepático humanoÉ um meio de cultura celular químicamente definido para a construção e manutenção de órgãos cancerígenos de vasos biliares no fígado humano. Os oncólogos da origem do paciente resumem o genoma e as características patológicas do tumor original e, portanto, têm grandes perspectivas na pesquisa médica e na medicina de precisão.

2、 Informação do produto

3、 Outros materiais e reagentes próprios

4、 Preparação de meios de cultura de órgãos de câncer de vasos biliares no fígado humano

Utilizando técnicas de operação estéril para preparar meios de cultura de câncer de órgãos intrabiliares do fígado. Aqui está a preparação10mLOs exemplos de meios de cultura, se a quantidade necessária for diferente, podem ser ajustados de acordo.

1、 Fatores de Cultura de Órganos de Câncer de Vasos Biliares no Fígado Descongelados no GeloB(50x)e fatores de cultura de órgãos de câncer biliar no fígadoC(250x)。

Observação: após o descongelamento, é recomendado o fator de cultura de câncer de órgãos biliares no fígadoB(50x)Fatores de cultura de órgãos de câncer de vasos biliares no fígadoC(250x). Depois de partilhar separadamente, para evitar o congelamento repetido.

2、 Será200 uLFatores de Cultura de Órgãos de Câncer de Vasos Biliares no FígadoB(50x)，40μLFatores de Cultura de Órgãos de Câncer de Vasos Biliares no FígadoC(250x)Adicionar a9,76 mlO câncer de órgão biliar no fígado é misturado e preparado para10mLMédio de cultura de órgãos de câncer biliar no fígado.

Nota: O meio de cultura de câncer intrabiliar do fígado pode ser2-8°CArmazenamento, recomendado para uso em duas semanas. Fatores de Cultura de Órgãos de Câncer de Vasos Biliares no FígadoB(50x)Contém antibióticos bacterianos e fúngicos.

5、 Cultura original de órgãos cancerígenos intrabiliares do fígado de origem do paciente

Observação: Estudos envolvendo materiais de tecidos humanos principais devem seguir todas as regulamentações institucionais e governamentais relevantes. O consentimento informado de todos os participantes deve ser obtido antes de coletar o material de tecido humano principal.

a) Estabelecimento de órgãos de câncer de vasos biliares no fígado humano primitivo

1、 Recolha os fragmentos de tecido canceroso intra-hepatico primário em uma solução gelada de armazenamento de tecido primário com um tubo centrífugo. Mantenha a amostra de tecido4℃até que a separação comece.

2、 Avaliar se os fragmentos de tecido obtidos são compostos de epitêlis. Se houver tecido gorduroso ou muscular, use uma faca ou pinça sob um microscópio anatômico para remover o máximo possível desses componentes não epiteliais. Se não houver gordura ou tecido muscular, continue imediatamente com o próximo passo.

3、 com meio de base epitelial ouDPBSLave o tecido duas vezes.

4、 Usar uma faca ou cortar o tecido em1-3 milímetros³Pequenos pedaços, colocados em um prato de cultura celular.

5、 Em37℃Para baixo10mLSolução de digestão do tecido tumoral15 mlFragmentos de tecido digestível no tubo centrífugo, o tempo de digestão variável, a partir de30minutos.1.5Horas não esperam. Monitore cuidadosamente o processo digestivo, pode ser adequadamente soprado para observar o grau de digestão. Quando a maioria dos segmentos de organização são capazes de passar1mlQuando o pipete aspira a cabeça, o processo digestivo é concluído.

6、 SeráFBSAdicionado à mistura de digestão de tecidos, a concentração final é2%e uso100 milímetrosFiltro de células.

7、 recolhendo e em4°Cabaixo250gCélulas filtradas por centrifugação3Um minuto. Em caso de precipitação vermelha visível, inale o supernatante e use2mLResuspende o lito de glóbulos vermelhos para separar os glóbulos vermelhos a temperatura ambiente1minutos e em4°Cabaixo250gCentrífuga3Um minuto.

8、 Aspirar o líquido supernatante e ressuspender o precipitado no meio de base, em4°Cabaixo250gCentrífuga3Por um minuto, repita este passo novamente.

9、 Excluir o líquido e ressuspender o precipitado no cola de matriz. A cola de matriz deve ser mantida no gelo para evitar a sua coagulação. realizar o processo o mais rápido possível. A quantidade de cola de matriz usada depende do tamanho da partícula. aproximadamente10，000As células devem ser vacinadas25μLEm cola de base.

10、 Não dilua excessivamente a cola de matriz (a proporção de cola de matriz deve ser>70%(Volume da matriz/volume total)), porque isso pode inibir a formação correta de gotas sólidas. Coloque a cola que contém órganos em24Na parte inferior da placa de cultura de células porosas, cada gota gira em torno do centro do poroso aproximadamente30μL。

Observação: Uma vez que os orgânicos voltarem a ser suspensos no cola de matriz, faça o plantio o mais rápido possível, pois o cola de matriz pode coagular no tubo de ensaio ou na cabeça de aspiração do pipete. Não deixe as partículas de base entrar em contato com a parede do tubo.

11、 Coloque a placa de cultivo no37°Ce5%CO₂na caixa de cultivo15-25minutos, deixe o gel curar.

12、 Preparar a quantidade necessária de meios de cultura de câncer de órgãos intrabiliares do fígado.

13、 Uma vez que a matriz é coagulada (15-25minutos), abra a placa e adicione cuidadosamente a cada buraco500μLMédio de cultura de órgãos de câncer biliar no fígado.

NOTA: Não adicione o meio diretamente ao topo da gota de gel da matriz, pois isso pode danificar a estrutura já coagulada.

14、 Coloque a placa de cultivo em37℃e5%CO₂na caixa de cultivo térmico.

15、 Cada vez3-4Substitua o meio uma vez ao dia, aspirar cuidadosamente do buraco e substituí-lo por um meio orgânico fresco pré-aquecido.

16、 O crescimento orgânico deve ser monitorado de perto e, idealmente, o câncer biliar no fígado deve7-10construído em dias.

b) Cultura de transmissão de órgãos de câncer biliar no fígado humano

1、 Sobre os organoides raspados com uma cabeça de pistola lubrificada e transfera a suspensão de organoides e meios para a cabeça lubrificada1,5 milhares de LEPNo tubo.

2、 A cabeça da pistola lubrificada com líquido lubrificante resuspende fortemente a suspensão orgânica para separar os orgânicos da cola matriz.

3、 250gCentrífuga à temperatura ambiente3 minutos。

4、 Eliminar, usar fluido digestivo orgânico ou destruir mecânicamente. Para a dissociação celular com o uso de fluido digestivo orgânico, a suspensão orgânica é ressuspendida no fluido digestivo orgânico, o pipete é repetidamente soprado para cima e para baixo e colocado em37°Cincubar até que os órgãos sejam dissolvidos. Usando uma pistola de filtro para cada2Respire repetidamente por minutos.8Em segundo lugar, para ajudar a desligação dos órgãos. O acompanhamento atento do processo digestivo minimiza o tempo de incubação em dissoluções orgânicas. Em caso de falha mecânica,1,5 milímetrosSuspensão de órgãos epiteliais em meio de base. Sucta com cuidado a suspensão orgânica com uma pipeta, subindo e baixando repetidamente30Em segundo lugar, isso ajudará a digestão.

Observação: não dissolvar mais do que em dissolução orgânica7minutos, porque isso pode levar a pior crescimento ou até a destruição de organoides. De acordo com a experiência, se for uma mistura de pequenos pedaços de células, pode ser observado por10-50Quando uma célula é formada, a digestão é concluída.

5、 Após a digestão, use1mlO meio de base epitelial é lavado uma vez e, em seguida, a temperatura ambiente250gCentrífuga3Um minuto.

6、 Descargar o limpo, com a quantidade apropriada de goma de matriz para resuspender os órgãos, depois de resuspender colocado no gelo, o tempo de resuspensão não excede30 anosPara evitar a coagulação precoce da cola de base.

Nota: a proporção de diluição do gel de matriz deve ser70%acima para garantir a estabilidade estrutural da cola matriz durante o processo de cultivo.

7、 Ponha uma suspensão misturada de cola de matriz e orgânicos48A parte inferior da placa de orifício é positiva, evitando o contato da suspensão com a parede lateral da placa de orifício, cada orifício15-20uLÀ direita. Observação: para evitar a coagulação da goma de matriz à temperatura ambiente, esta etapa deve ser concluída o mais rápido possível.

8、 A placa de cultivo após a vacinação37℃Dióxido de carbono em uma incubação termostática15 minutosEsquerda e direita para a base gel coagulação.

9、 Preparação de meios de cultura de câncer de órgãos biliares no fígado.

10、 Após a coagulação do gel da matriz, adicione o meio de cultura de órgãos de câncer de vasos biliares no fígado humano preparado,48Placa de furos adicionado a cada furo250uLmeios de cultivo.

11、 Será48Placa de furo colocada em37℃O dióxido de carbono é cultivado em uma caixa de cultivo até que os organoides precisem de mais experimentos.

V2.0Edição

Atualização:2025/6/21