Kit de meios de cultura de órgãos epiteliais gastricos humanos baseados em modelos Plus

Kit organoide epitelial gástrico humano mais

Conjunto de meios de cultura de órgãos epiteliais do estômago humanoMais

1、 Descrição do produto

Kit de meios de cultura de órgãos epiteliais do estômago humano baseado em modelosMais（Kit organoide epitelial gástrico humano maisÉ um meio de cultura celular químicamente definido para a construção e manutenção do epitelioide estomacal humano de origem de células-tronco adultas. A auto-renovação das células epiteliais do estômago é impulsionada pela proliferação de células tronco e suas células precursoras. Os epitelioides do estômago humano apresentam a maioria das características do epitelio do estômago em termos de estrutura, composição de tipo celular e auto-renovação. Assim, oferece esperança para os pesquisadores da estabilidade e doença do estômago humano.

2、 Informação do produto

3、 Outros materiais e reagentes próprios

4、 Instruções de uso do meio de cultura de órgãos epiteliais do estômago humano

1、 Depois de receber o meio de cultura orgânica, coloque o meio de cultura em4refrigerador para descongelar;

2、 Após o descongelamento do meio de cultura, misture completamente para cima e para baixo, em um armário de biossegurança ou mesa de trabalho limpa para dividir de acordo com as necessidades diárias, é recomendado dividir em10mL /tubos;

3、 O meio de cultivo após a partilha deve ser selado e armazenado em-20℃Pode ser usado depois de remover o meio partilhado e colocar o equilíbrio de temperatura ambiente.

5、 Estabelecimento e cultura de transmissão de órgãos epiteliais do estômago humano

Observação: Estudos envolvendo materiais de tecidos humanos principais devem seguir todas as regulamentações institucionais e governamentais relevantes. O consentimento informado de todos os participantes deve ser obtido antes de coletar o material de tecido humano principal.

a) Estabelecimento do órgão epitelial do estômago humano primitivo

1、 As amostras de tecido originais devem estar separadas.5 minutosIntroduzir líquido pré-refrigerado para conservação de tecidos vivos (2-8℃No tubo de amostra, a amostra precisa ser coberta por um preservativo de tecido vivo (se a amostra já foi colocada em outro tampão ou meio de cultura, substitua a solução inteira por um preservativo de tecido vivo pré-refrigerado). baixa temperatura)2~8℃Transporte para o laboratório.

2、 Coloque a cola antes do experimento4℃Descongelar no gelo, enquanto remover o meio para colocar o equilíbrio de temperatura ambiente. Os tubos centrífugos, tubos de ensaio ou cabeças de plástico que entram em contato com as células precisam ser lavados com uma lubrificação anti-adesiva de cultura orgânica.

3、 Na mesa de trabalho limpa, a amostra é transferida para um prato de petri para avaliar se o tecido obtido é composto de epitelia. Se houver tecido gorduroso ou muscular, use uma faca ou pinça sob um microscópio anatômico para remover o máximo possível desses componentes não epiteliais. Se não houver gordura ou tecido muscular, continue imediatamente com o próximo passo.

4、 Utilizando meios de base epitelial ou contendo antibióticosDPBSLave o tecido duas vezes.

5、 Usar pinças para transferir a organização para1,5 milímetrosNo tubo centrífugo, no gelo com estéril será quebrado em0.5~2mm²Tamanho.

6、 Usar os tecidos cortados50Multiplicar o volume de tecido em suspensão e transferir para15 mlDentro do tubo centrífugo, soprar o bloco de tecido suspenso. em37℃，100rpmCondições de agitação térmica em cama, oscilação horizontal de digestão15-30minutos, a cada10Minutos para observar a digestão do tecido, quando o bloco de tecido está claramente disperso, a suspensão é mais turbulenta, tomar a quantidade apropriada de suspensão de digestão do tecido, a suspensão tem mais grupos de células vivas para terminar a digestão, se o fragmento de tecido é maior ou a digestão não pode prolongar adequadamente o tempo de digestão. Especificações diferentes podem ser usadas durante a digestão (ordem de grande a pequeno como10mL、5 ml、1mlA pipeta sopra a suspensão de digestão do tecido para ajudar a digerir completamente. Quando a maioria dos segmentos de organização são capazes de passar1mlQuando o pipete aspira a cabeça, o processo digestivo é concluído.

7、 SeráFBSAdicionado à mistura de digestão de tecidos, a concentração final é2%e uso100 milímetrosFiltro de células.

8、 Recolha o filtro e4℃abaixo250gCentrífuga3Um minuto. Em caso de precipitação vermelha visível, absorba o líquido superior e adicione2mLResuspende o lito de glóbulos vermelhos para separar os glóbulos vermelhos a temperatura ambiente1minutos e em4℃abaixo250gCentrífuga3Um minuto.

9、 Absorber o líquido epidérmico e ressuspender o precipitado no meio de base epidérmico,4℃abaixo250gCentrífuga3Por um minuto, repita este passo novamente para remover o líquido digestivo eFBSAntes da centrifugação, a quantidade apropriada de suspensão é desejável para o teste de atividade celular.

10、 Absorber o líquido superior, de acordo com as necessidades de cultura para obter a quantidade adequada de precipitação celular para adicionar o gel matriz (>70%e misturar no gelo (Nota: misturar o movimento de soprar deve ser suave, o tabu gerar uma grande quantidade de bolhas, a mistura a temperatura normal precisa ser controlada em15Em segundos), misturado e colocado no gelo. NOTA: A cola de base deve ser mantida no gelo para evitar a sua coagulação. realizar o processo o mais rápido possível. aproximadamente10,000As células devem ser vacinadas25μLEm cola de base. Não dilua excessivamente a cola de matriz (a proporção de cola de matriz deve ser>70%(Volume da matriz/volume total)), porque isso pode inibir a formação correta de gotas sólidas.

11、 Ponha a suspensão misturada de goma de matriz e células no fundo da placa do orificio da cultura, usando a cabeça da pistola para planejar ligeiramente a suspensão, prestando atenção para evitar que a suspensão entre em contato com a parede lateral da placa do orificio. (Recomendação:96Vacinação da placa3~10μL/buracos,48Vacinação da placa10~20μL/buracos,24Vacinação da placa20~30μL/buracos).

Observação: Uma vez que os orgânicos voltarem a ser suspensos no cola de matriz, faça o plantio o mais rápido possível, pois o cola de matriz pode coagular no tubo de ensaio ou na cabeça de aspiração do pipete.

12、 Coloque a placa de cultivo no37℃e5%CO₂na caixa de cultivo15-25minutos, deixe o gel coagular.

13、 Após a coagulação do gel da matriz, adicionar lentamente o meio orgânico equilibrado à temperatura ambiente ao longo da parede para evitar danificar a estrutura coagulada. (Recomendação:96Adição de placa de furo100 μL/buracos,48Adição de placa de furo250μL/litroburacos,24Adição de placa de furo500μL/buracos). NOTA: Não adicione o meio diretamente ao topo da gota de gel da matriz, pois isso pode danificar a estrutura já coagulada.

14、 Coloque a placa de cultivo em37℃e5%CO₂na caixa de cultivo térmico.

15、 Cada vez2~3Substituir o meio uma vez ao dia, cuidadosamente aspirar o meio do buraco e adicionar o meio orgânico fresco equilibrado à temperatura ambiente.

16、 Monitorar de perto o estado de crescimento dos órgãos, idealmente, os órgãos mamários humanos devem7-14construído em dias.

b) Cultura de transmissão de órgãos epiteliais do estômago humano

1、 cultivo de órgãos para o diâmetro de100 ~ 500μmQuando o tamanho (ou quando a escuridão não aumenta mais), a transmissão orgânica pode ser realizada (cerca de cada geração).1~2semana). Os seguintes materiais consumíveis em contato com as células devem ser lavados com um líquido lubrificante:

2、 Absorber os meios antigos, adicionar outros meios epiteliais de base volumétrica, raspar suavemente (ou soprar) a goma matriz e a mistura de órgãos com um raspador celular ou uma cabeça de aspiração de pipeta, transferir para1,5 milímetrostubo centrífugo (coleta máximo por tubo)2~3Órgãos porosos, para evitar excesso de volume e baixa eficiência digestiva), soprando5~10Em segundo lugar, separar os orgânicos e a matriz,300gCentrífuga3Um minuto.

3、 Remover a adição de líquido5O volume de líquido digestivo orgânico duplicado do gel matriz e mistura orgânica, depois de soprado e misturado, colocado em37℃Digestão na caixa5~10Um minuto. Tire a mistura. Pegue.10μLA viscosidade líquida misturada verifica se a digestão é feita em pequenos aglomerados celulares, a digestão insuficiente pode prolongar adequadamente o tempo de digestão. Se a contagem celular for necessária para ser digerida em células individuais, o tempo de digestão pode ser prolongado até10~20Minutos após a terminação da digestão, a coloração azul é esperada para a contagem celular. O acompanhamento atento do processo digestivo minimiza o tempo de incubação em dissoluções orgânicas.

4、 Após a digestão, adicione5O meio de base epitelial de volume múltiplo é soprado e misturado para terminar a reação digestiva, em seguida250gCentrífuga3Um minuto.

5、 Absorber o líquido epitelial e limpar com o meio de base epitelial2Em seguida, para remover os resíduos de líquido digestivo. A segunda limpeza permite a coleta de órganos fundidos no mesmo tubo centrífugo.

6、 Depois da limpeza, as células no precipitado centrífugo são cultivadas para a transmissão, adicionando o gel matriz no precipitado celular (>70%e misturar no gelo (note que o movimento de mistura deve ser suave, evitando a geração de uma grande quantidade de bolhas, a mistura a temperatura normal precisa ser controlada em15Em segundos), misturado e colocado no gelo. Nota: a proporção de diluição do gel de matriz deve ser70%acima para garantir a estabilidade estrutural da cola matriz durante o processo de cultivo.

7、 Ponha a suspensão misturada de goma de matriz e células no fundo da placa do orificio da cultura, usando a cabeça da pistola para planejar ligeiramente a suspensão, prestando atenção para evitar que a suspensão entre em contato com a parede lateral da placa do orificio. (Recomendação:96Vacinação da placa3~10μL/buracos,48Vacinação da placa10~20μL/buracos,24Vacinação da placa20~30μL/buracos). Observação: para evitar a coagulação da goma de matriz à temperatura ambiente, esta etapa deve ser concluída o mais rápido possível.

8、 Coloque a placa de cultivo no37℃e5%CO₂na caixa de cultivo15-25minutos, deixe o gel coagular.

9、 Após a coagulação do gel da matriz, adicionar lentamente o meio orgânico equilibrado à temperatura ambiente ao longo da parede para evitar danificar a estrutura coagulada. (Recomendação:96Adição de placa de furo100 μL/buracos,48Adição de placa de furo250μL/litroburacos,24Adição de placa de furo500μL/buracos). NOTA: Não adicione o meio diretamente ao topo da gota de gel da matriz, pois isso pode danificar a estrutura já coagulada.

10、 Coloque a placa de cultivo em37℃e5%CO₂na caixa de cultivo térmico.

11、 Cada vez2~3Substituir o meio uma vez ao dia, cuidadosamente aspirar o meio do buraco e adicionar o meio orgânico fresco equilibrado à temperatura ambiente.

12、 Monitore de perto o estado de crescimento dos orgânicos até que os orgânicos precisem fazer o próximo experimento

V2.1Edição

Atualização:2025/06/20