Kit de meios de cultura de órgãos intestinais humanos baseados em modelos

Kit organoide intestino humano

Conjunto de meios de cultura de órgãos do intestino delgado humano

1、 Descrição do produto

Kit de Cultura de Órgãos Intestinais Humanos (Kit organoide intestino humanoÉ um kit de meio de cultura de órgãos do intestino delgado para a construção e manutenção de fontes de células-tronco adultas do intestino humano, que fornece um conjunto completo de reagentes a partir da separação, recuperação, análise e cultura de atividade do intestino delgado. O órgão do intestino delgado humano é composto principalmente de células-tronco do intestino delgado, células de expansão rápida, células de absorção intestinal, células de Pan, células em forma de copo e uma pequena quantidade de células endócrinas do intestino, em termos de capacidade de auto-renovação, estrutura de tecido, tipo de célula e função, o órgão do intestino delgado humano pode parcialmente reproduzir as características do epitêlio humano, portanto, é o modelo in vitro ideal para a estabilidade intestinal e o estudo do mecanismo da doença.

2、 Informação do produto

3、 Outros materiais e reagentes próprios

4、 Preparação de meios de cultura de órgãos do intestino delgado humano

Preparação de meios de cultura de órgãos do intestino delgado humano em uma mesa de trabalho estéril ultra-limpa. Para preparar10mLO meio de cultura de órgãos do intestino delgado humano, por exemplo, se a quantidade necessária for diferente, a dose pode ser ajustada de acordo.

1、 Fator de cultura de órgãos intestinais humanos descongelados no geloB(50x)fatores de cultura de órgãos do intestino delgado humanoC(250x)fatores de cultura de órgãos do intestino delgado humanoD(250x)。

Observação: após o descongelamento, recomenda-se o fator de cultura de órgãos do intestino delgado humanoB(50x)Fatores de cultura de órgãos do intestino delgado humanoC(250x). Depois de partilhar separadamente, para evitar o congelamento repetido.

2、 Após o descongelamento do meio de cultura, misture completamente para cima e para baixo, em um armário de biossegurança ou mesa de trabalho limpa para dividir de acordo com as necessidades diárias, é recomendado dividir em10mL /Tubo.

3、 O meio de cultivo após a partilha deve ser selado e armazenado em-20℃Pode ser usado depois de remover o meio partilhado e colocar o equilíbrio de temperatura ambiente.

Nota: O meio de cultura de órgãos do intestino delgado humano após a formulação pode ser2-8°CArmazenamento, recomendado para uso em duas semanas. Além disso, o fator de cultura de órgãos do intestino delgado humanoB(50x)Contém antibióticos bacterianos e fúngicos(50x)。

5、 Construção e cultura de transmissão de órgãos do intestino delgado humano

Observação: Estudos envolvendo materiais de tecidos humanos principais devem seguir todas as regulamentações institucionais e governamentais relevantes. O consentimento informado de todos os participantes deve ser obtido antes de coletar o material de tecido humano principal.

a) A construção dos órgãos do intestino delgado primitivos

1、 Amostragem: coleta o tecido do intestino delgado humano original em um líquido protetor de tecido original gelado usando um tubo centrífugo para manter a amostra de tecido no4°Caté começar a separação.

2、 Limpeza: transferir a amostra de tecido para o pré-arrefecimentoDPBSEm um prato de petri tampão, a cavidade intestinal está virada para cima, usa uma mão para segurar o tecido intestinal em uma extremidade, a outra mão usa um pedaço para raspar suavemente a superfície da cavidade intestinal pelo intestino, até que o pelo intestinal é raspado, colocar o tecido intestinal no novo conteúdoDPBSLimpeza de pratos de Petri, repetir a limpeza2Segunda vez. Partir o intestino delgado após a limpeza2 milímetrosLargo, transferido para um novo prato de Petri, comDPBSLimpeza2De novo.

3、 Digestão: transferir o segmento intestinal limpo para o que contém5 milímetros / L EDTApré-frioDPBSDigestivo, colocado em4℃Ou incubar em gelo quebrado20 ~ 30 minutosDigestão.20 minutosA esquerda e a direita podem ser usadas para soprar suavemente o segmento intestinal, remover o microscópio limpo para observar, até a aparição de um cachorro completo pode terminar a digestão, se nenhum cachorro pode prolongar adequadamente o tempo de digestão.

4、 Limpeza: Depois de terminar a digestão, transferir os resíduos de tecido para o novo conteúdoDPBSLimpeza do prato de Petri, repetir2Depois de removerEDTA。

5、 Suspensão: Usar5 mlPipeta em pré-frio0,1% BSAdeDPBSum prato de Petri ou50 mlSobre o tubo centrífugo, suspender os fragmentos de tecido, para que o tecido atravesse repetidamente a ponta do tubo de pipeta para gerar força de corte mecânica para separar o cachorro da base, tomar uma parte da suspensão, quando você pode ver uma grande quantidade de estruturas cachorrosas, parar de soprar e realizar a suspensão de tecido após o soprado70 milímetrosFiltro de rede.

6、 Coleta: coleta a suspensão de tecido que atravessa o filtro,300gforça centrífuga4℃Centrífuga3 minutos。

7、 Contagem: descartar, usar1mL0,1% BSAdeDPBSRecuperar o tecido, retirar20 μLA suspensão é especulada e a contagem da célula é feita, após a contagem é concluída, a suspensão contém a quantidade de célula necessária,300gforça centrífuga4℃Centrífuga3 minutosDepois, deixe no gelo.

8、 Depositar tecido em suspensão com a quantidade apropriada de goma de matriz, a densidade de suspensão recomendada é de cada10μLSuspensão de goma de matriz contém70para100Um cachorro. Ponha-o no gelo. Não demora mais.30 anosPara evitar a coagulação precoce da cola de base.

Nota: a proporção de diluição do gel de matriz deve ser70%acima para garantir a estabilidade estrutural da cola matriz durante o processo de cultivo.

9、 Ponha uma suspensão misturada de gel matriz e células de tecido24A parte inferior da placa é positiva, cada buraco30μLÀ esquerda e à direita, evite o contato da suspensão com a parede lateral da placa de orifício.10.A placa de cultivo após a vacinação37℃Dióxido de carbono em uma incubação termostática30 minutosEsquerda e direita para a base gel coagulação.

10、 Após a coagulação do gel da matriz, adicionar lentamente o meio de cultura de órgãos do intestino delgado humano preparado ao longo da parede,24placa furo por furo500μLEvitar a destruição da estrutura consolidada.

11、 Será24Placa de furo colocada em37℃Cultivo em uma caixa de dióxido de carbono.

12、 cada2~3Substituir o meio de cultura uma vez por dia, a substituição do meio de cultura deve evitar a destruição da cola de matriz. Monitorar de perto o estado de crescimento dos órgãos, idealmente, os órgãos do intestino delgado humano devem5para7construído em dias.

b) Cultura de transmissão de órgãos do intestino delgado humano

1、 O órgão intestinal delgado humano é cultivado até o diâmetro de200 ~ 500μmQuando o tamanho (ou quando a escuridão não aumenta mais), a transmissão de órgãos do intestino delgado humano (cerca de cada geração) pode ser realizada.5ao redor do dia). Sopre os órgãos raspados com uma cabeça de pistola lubrificada e transfira a suspensão de órgãos do intestino delgado e do meio de cultura para o órgão lubrificado.1,5 milhares de LEPNo tubo.

2、 Sobrar com força a suspensão de órgãos pesados com a cabeça da pistola lubrificada com líquido de lavagem, soprar várias vezes (5~102) fazer o órgão intestinal delgado ser separado do gel matriz,300gCentrífuga3 minutos。

3、 Abandone, junte-se1mlO meio básico sopra os orgânicos novamente5~10Em segundo lugar, tomar uma pequena quantidade de suspensão para observar o estado dos órgãos:

1) Se os órgãos foram dispersos em fragmentos, você pode escolher soprar mecânicamente os órgãos dispersos diretamente após300gCentrífuga3 minutosApós a centrifugaçãoPBSou limpeza do meio de base2Segunda vez.

2) Se os órgãos são mais completos300gCentrífuga3 minutosDepois, abandone e junte-se.5O volume do líquido digestivo orgânico duplicado do gel matriz e mistura de órgãos do intestino delgado humano, depois de soprado e misturado, colocado em37℃Digestão na caixa2 minutosInscreva-se5O meio de base multiplicado pelo volume do líquido digestivo termina a digestão. Após a centrifugaçãoPBSou limpeza do meio de base2Segunda vez.

4、 Depois de limpar com uma quantidade apropriada de goma de matriz, o organoide é precipitado e colocado em gelo após a suspensão e o tempo de suspensão não excede30 anosPara evitar a coagulação precoce da cola de base.

Nota: a proporção de diluição do gel de matriz deve ser70%acima para garantir a estabilidade estrutural da cola matriz durante o processo de cultivo.

5、 Ponha uma suspensão misturada de cola de matriz e orgânicos24A parte inferior da placa de orifício é positiva, evitando o contato da suspensão com a parede lateral da placa de orifício, cada orifício30μL左右。

Observação: para evitar a coagulação da goma de matriz à temperatura ambiente, esta etapa deve ser concluída o mais rápido possível.

6、 A placa de cultivo após a vacinação37℃Dióxido de carbono em uma incubação termostática15 minutosA esquerda e a direita devem ser retiradas após a formação do gel.

7、 Preparação de meios de cultura de órgãos do intestino delgado humano.

8、 Após a coagulação do gel da matriz, ao longo da parede do orifício, adicione o meio de cultura de órgãos do intestino delgado humano pré-aquecido,24placa furo por furo500μL。

9、 Coloque a placa de cultura celular no37℃O cultivo é realizado em uma caixa de cultivo, observando de perto o estado de crescimento dos órgãos do intestino delgado humano, cada3A foto foi tirada sob o microscópio invertido para registrar a forma e distribuição dos órgãos do intestino delgado humano em vários campos de visão.

V2.0Edição

Atualização:2025/6/17