Preparação de anticorpos monoclonais

Anticorpos monoclonais (MAb) são anticorpos produzidos por agrupamentos de determinação de antígenos específicos da agulha, a tecnologia monoclonal também conhecida como tecnologia de híbridos surgiu em 1975 e foi fundada por G. KOhler e Milstein. O principal princípio é usar as células B que produzem anticorpos para se cruzar com as células tumorais e formar células híbridas para produzir anticorpos.

Os principais passos da técnica de preparação de híbridos monoclonavirus são dirigidos ao corpo, incluindo:

1) Preparação de antígenos,

2) Animais imunes,

(3) Preparação de células de baço imunológico e células de mieloma,

4) Fusão celular;

(5) cultura seletiva de células híbridas,

(6) triagem de células híbridas;

(7) Clonação de células híbridas;

(8) Detecção de anticorpos monoclonais;

(9) Estabelecimento da linha celular do híbrido de anticorpos monoclonais secretos:

(10) Preparação em grande quantidade de anticorpos monoclonais.

Processo de preparação de anticorpos monoclonais:

Animais imunes são ratos imunes a antígenos destinados a produzir linfocitos B alérgicos. Os ratos Balb/c fêmeas de 6 a 8 semanas de idade são geralmente escolhidos para serem imunizados de acordo com um programa imunológico pré-elaborado. Os antígenos entram nos órgãos imunológicos periféricos através da circulação sanguínea ou linfática, estimulando os clones correspondentes de linfocitos B para ativá-los, multiplicá-los e diferenciá-los em linfocitos B alérgicos.

2, fusão celular usando o método de remoção de glóbulos oculares e hemorragia para executar ratos, operação estéril para remover o baço, pressionar no prato plano, preparar a suspensão de células do baço. As células de mieloma congênito preparadas são misturadas com as células do baço do rato em uma certa proporção e o polietil-diol estimulante de fusão é adicionado. Sob o polietil-diol, vários linfocitos podem se fundir com as células do mieloma, formando células de híbrido.

O objetivo da cultura seletiva é triar as células híbridas fusionadas, geralmente usando o meio seletivo HAT. No meio HAT, as células de mieloma não fundidas morrem devido à falta de subpurina avipurina fosforibose transferase, que não pode ser usada para sintetizar DNA por meio de remédios. Os linfocitos não fusionados, embora tenham a subambulina avipurina fosforibose transferase, por si mesmos não podem sobreviver a longo prazo em vitro e morrem gradualmente. Somente as células híbridas fusionadas podem sobreviver e multiplicar-se no meio HAT, devido à obtenção da transferase subambulina de baço e à propriedade de proliferação infinita das células do mieloma.

A triagem e a clonação de células de híbridos que crescem no meio HAT são apenas algumas das células que secretam anticorpos monoclonais específicos pré-determinados, portanto, a triagem e a clonação devem ser feitas. Normalmente, a diluição limitada é usada para a cultura clonal de células híbridas. Utilizando métodos imunológicos sensíveis, rápidos e específicos, as células híbridas positivas que podem produzir anticorpos monoclonais necessários são selecionadas e amplificadas.

Após a identificação completa do tipo, subclasse, especificidade, afinidade da imunoglobulina dos anticorpos monoclonais secretos, identificação dos epitopos dos antígenos e suas moléculas, é congelado oportunamente.

5、Preparação em massa de anticorpos monoclonais Preparação em massa de anticorpos monoclonais é importante a adoção de métodos de inducção in vivo e corpo animal

Lei de cultivo externo.

(1) Modo de indução in vivo para os ratos Balb / c, primeiro a injeção abdominal 0. 5 ml de greta líquida ou deplantano para pré-tratamento. Depois de 1-2 semanas, as células híbridas são vacinadas dentro da cavidade abdominal. As células do híbrido se multiplicam na cavidade abdominal do rato e produzem e secretam anticorpos monoclonais. Cerca de 1-2 semanas, o abdômen do rato é visível. Pumpar a água abdominal com uma seringa pode obter uma grande quantidade de anticorpos monoclonais.

(2) O método de cultura in vitro coloca as células híbridas em garrafas para cultivo. Durante a cultura, as células do híbrido produzem e secreçam anticorpos monoclonais, recolhem líquido da cultura e removem as células e seus fragmentos por centrifugação para obter os anticorpos monoclonais necessários. Mas a quantidade de anticorpos produzidos por esse método é limitada. Nos últimos anos, várias novas tecnologias de cultura e dispositivos surgiram constantemente, aumentando significativamente a produção de anticorpos. Após a fusão das células do híbrido, a triagem deve ser feita. As células do híbrido são divididas em duas vezes: 1. selecionar as células do híbrido; Em segundo lugar, as células de hibrido selecionadas são selecionadas para produzir anticorpos específicos, os métodos e princípios de triagem são diferentes.

Serviço em parte experimental