Etapas de operação do kit ELISA de pesquisa científica de Xangai

Etapas de operação do kit ELISAApresentação:

Detecção de precisão, visão da vida - Shanghai Xingyue Biotechnology Co., Ltd.

(XinYu BioDetect, seu parceiro de pesquisa confiável)

Etapas de operação do kit ELISAComposição típica:

Um kit ELISA padrão geralmente contém os seguintes componentes:

Placa pré-embalada com microporos: placa de plástico de 96 ou 48 buracos, com anticorpos ou antígenos bem capturados pré-embalados (dependendo do tipo). É onde a reação ocorre.

2, marcador enzimático (ou marcador enzimático para detectar anticorpos / antígenos): Dependendo do tipo de ELISA, fornecer marcador enzimático para a peróxidase de raiz moringa ou fosfatase alcalina (para métodos indiretos ou de centrifugação), ou antígeno marcador enzimático (para métodos de concorrência).

Produto padrão: solução de gradiente da série de antígenos (ou anticorpos) com concentrações precisas conhecidas. Utilizado para desenhar curvas padrão para calcular a concentração do objeto a ser testado na amostra.

Detecção de anticorpos (somente por centrifugação): anticorpos não marcados contra outro epitopo do antígeno.

Liquido de diluição da amostra: usado para diluir a amostra para que sua matriz coincida com o padrão e o sistema de tampão, reduzindo a interferência não específica.

6, tampão de lavagem: geralmente tampão de fosfato contendo Twain-20. Utilizado para lavar a substância não ligada entre as etapas, reduzindo a interferência de fundo. A lavagem é a chave para o sucesso do experimento.

Liquido fechado: proteína sérica bovina ou solução de leite em pó desgordura comumente usada. Utilizado em locais não ligados na placa microporosa após o fechamento do pacote para evitar a adsorção não específica nas etapas seguintes e reduzir o fundo.

8 Solução de substância:

Para HRP: Tetrametilbifenamina ou 3,3',5,5'-tetrametilbifenamina comumente usada.

Para AP: para nitrobenzofosfato comumente usado.

9, líquido de terminação:

Para HRP-TMB: solução de ácido sulfúrico diluído comumente usado.

Para AP-pNPP: Solução comum *. Utilizado para terminar a reação enzimática e estabilizar a cor final.

10, placa de vedação: cobrir a placa microporosa na etapa de incubação para evitar a evaporação e a poluição.

Instruções: Etapas operacionais detalhadas, condições de conservação do reagente, precauções, resultados esperados e métodos de desenho de curvas padrão, etc.

Processamento de amostras e requisitos:

Sério: as amostras de sangue inteiro coletadas em um tubo de separação de soro são colocadas a temperatura ambiente durante 2 horas ou 4 ° C durante a noite e, em seguida, 1000 x g é centrifugado por 20 minutos para remover a limpeza ou manter a limpeza superior a -20 ° C ou -80 ° C, mas deve ser evitado congelamento repetido.

Plasma: coleta a amostra com EDTA ou heparina como anticoagulante e centrifuge a amostra em 2-8 ° C 1000 x g por 15 minutos dentro de 30 minutos após a coleta, a limpeza pode ser detectada ou a limpeza superior pode ser mantida a -20 ° C ou -80 ° C, mas deve ser evitado congelamento repetido.

Homologação de tecidos: lavar o tecido com PBS pré-refrigerado (0,01 M, pH = 7,4), remover o sangue residual (os glóbulos vermelhos fissados na homologação afetarão o resultado da medição), pesar o tecido e cortar. O tecido cortado com o volume correspondente de PBS (geralmente em uma relação de peso a volume de 1: 9, por exemplo, 1 g de amostra de tecido corresponde a 9 ml de PBS, o volume específico pode ser ajustado adequadamente de acordo com as necessidades experimentais e registrado. Recomenda-se a adição de inibidores de protease em PBS) para adicionar ao amortiguador de vidro e moer completamente no gelo. Para separar ainda mais as células do tecido, o molho homogêneo pode ser quebrado por ultra-som ou congelado repetidamente. Finalmente, a pasta será homogeneizada em 5000 x g por centrifugação por 5 a 10 minutos, para remover o teste de limpeza.

Limpeza de cultura celular: por favor, centrifuge 1000 x g por 20 minutos para remover a limpeza para ser detectada, ou coloque a limpeza superior a -20 ° C ou -80 ° C, mas deve ser evitado congelamento repetido.

Outras amostras biológicas: centrífuga de 1000 x g por 20 minutos para ser detectada imediatamente.

Aparência da amostra: a amostra deve ser clara e transparente e a suspensão deve ser removida por centrifugação.

Conservação da amostra: se a amostra é coletada dentro de uma semana para o teste pode ser mantida em 4 ° C, se não puder ser detectada a tempo, por favor, por uma única quantidade de uso, congelado em -20 ° C (detecção dentro de 1 mês), ou -80 ° C (detecção dentro de 6 meses), para evitar o congelamento repetido, a hemolisise da amostra afetará o resultado final do teste, portanto, a hemolisise da amostra não é aconselhável fazer este teste.

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