Serviços técnicos de síntese e modificação de polipéptidos

A síntese de polipéptidos é uma sequência de síntese de fase sólida geralmente sintetizada do extremo C (carboxilo) ao extremo N (amino). Anteriormente, a síntese de polipéptidos era realizada em solução chamada síntese de fase líquida. Desde que a Merrifield desenvolveu com sucesso o método de síntese de polipéptidos em fase sólida em 1963, o método de síntese de polipéptidos em fase sólida* tornou-se uma técnica comum na síntese de polipéptidos e proteínas, mostrando as vantagens da síntese líquida clássica*, reduzindo significativamente a dificuldade de purificação de cada etapa do produto. A síntese de polipéptidos é dividida em dois tipos: síntese de fase sólida e síntese de polipéptidos de fase líquida.

Princípio técnico experimental:

O sintetizador de polipéptidos usa a síntese de fase sólida como princípio de reação, no reator de vidro à prova de explosão fechado para que os aminoácidos sejam continuamente adicionados, reagidos e sintetizados de acordo com a ordem conhecida (sequência, geralmente do extremo C-carboxilo ao extremo N-amino-extremo), e a operação final obtém o veículo polipéptido. A síntese em fase sólida alivia significativamente a dificuldade de purificação de cada etapa do produto. Para evitar reações secundárias, as cadeias laterais dos aminoácidos envolvidos na reação são protegidas. O carboxilo é livre e deve ser ativado antes da reação.

Processo de operação experimental:

Desproteção: as colunas e monómeros protegidos pela Fmoc devem remover os grupos protetores dos aminos com um solvente alcalino (piperidina).

Ativação e cruzamento: o carboxilo do próximo aminoácido é ativado por um ativante. O monómero ativado se cruza com a reação amino livre para formar péptidos

A chave. Nesta etapa, uma grande quantidade de reagente de superconcentração é usada para conduzir a reação. Ciclo: Esta reação de duas etapas é repetida até que a síntese seja concluída.

3, lavagem e desprotecção: o polipéptido é lavado da coluna e seu grupo protetor é lavado e desprotegido por um agente desprotetor (TFA).

Tipo de modificação de péptidos:

Tecnologia de marcação C:

Amidação (C-termainal)

Aldeídos, álcool, pNA (P-Nitroanilide)

AMC、AFC、 Cysteamide, Ester, N-AlkyI Amides, etc.

Tecnologia de marcação N:

Acetilização Acetilizada (Acetilizada), Palmytolyl, HYNIC, Biotinylated, Br Acetilização (Bromoacetilated)

Reação de quelação (DOTA, DTPA conjugado), formaldeído (Formilated), tetraalquilo, octoalquilo (Myristoylated), âmbar acilação, palmitização, maçã acidificação, acidificação de gordura, etc. (Succinylated)

Modificação da marca fluorescente:

Modificações em C: AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110

N端修饰: Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-odoacetamido fluoresceína Rodamina 110 e Rodamina B Luciferina, EDANS

FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamina 101, 5-TAMRA

4 Reação cíclica:

Anéis intermediários, aneis especiais (N -> C ou Head to Tail)

2 pares de ligações de enxofre, 3 pares de ligações de enxofre (formação de ligações S-S), formação de triúlidos, péptidos cíclicos naturais

5 Modificação de metilação:

Metilação da cadeia lateral Lys(For),LysS(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)N Metilação terminal (N-Me Arg, N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N-

Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)

Várias modificações especiais:

各种偶联(BSA, KL H péptidos conjugados para produção de anticorpos), fosf酸zação (fosfoserina, fosfotreonina, fosfotirosina), sulfonização (tirosina sulfatada ou serina), MAPS (péptido antigénico múltiplo), 糖péptidos (glicopeptidos) PEG modificação (PEGilação)

Observações experimentais:

Os clientes oferecem:

Sequência de péptidos, quantidade, pureza e requisitos especiais

2, polipéptidos congelados podem ser conservados em -20 graus ou conservados a temperatura ambiente

A solução de péptido é muito instável do que a forma de liofilização, e a solução deve ser conservada para um pH neutro (5-7) -20 graus.

Para evitar o congelamento repetido da amostra,HaoDividir em pequenos armazenamentos.

Padrões de entrega:

Polypéptidos, dados.

Outros:

A maioria dos péptidosXuanO solvente é água de bombeamento ultrapura, e ácido Z diluído ou amônia também são úteis para a dissolução de polipéptidos alcalinos ou ácidos, respectivamente. Se estes métodos são usados ​​para polipéptidos que ainda não são dissolvidos, é recomendado dissolver com DMF, uréia, guanidiniam, cloreto, acetonitnle.

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