Kit de purificação RNAclean

PCRQuais reagentes e equipamentos são necessários para a reação?

Reagentes:
ModeloDNA：PCRReação requer modeloDNAextraído de células, tecidos e sangue.DNAetc.; Primário:PCRReação dos dois primeiros, respectivamente, com o modeloDNAAs áreas específicas necessárias para o emparelhamento de ambas as extremidades, os primeiros também podem ser sintetizadosTAPrimários usados ​​em clonagem;dNTPs：PCRSão necessárias quatro reaçõesdNTPsincluindo a desoxiadenotida (ATP(Desoxitimotíde)dCTPDesoxigénitos (dGTP(Ácido desoxicitocínico)dTTPpara a divisão celular,DNAprocessos biológicos, como a síntese, paraPCRModelos expandidosDNAAmpliação e ampliação da cadeia;DNA do TaqPolimerase:PCRPolimerase necessária para a reação, uso geralTaqpolimerase, há outros tipos de polimerase comoPFU、Fusãoetc., para ampliaçãoDNAcadeia;tampão PCRSolução: SimPCRA reação tem um efeito tampão, regulando a reaçãoO pHSal de sulfato de hidrogênioSDSCompostos orgânicos de pequenas moléculas, como formaldeído, podem melhorarPCRespecificidade da reação, aumentando assim a eficiência da reação; Sistema enzimático:PCRA amplificação tende a envolver etapas experimentais como recombinação, construção e sequenciamento, muitas vezes exigindo operações enzimáticas.Marca:Um padrão de peso molecular para distinguirDNAFerramenta do tamanho da peça.DNAKit de purificação: para purificaçãoPCRprodutos de reação;
Equipamento:
PCRInstrumento: usado para controlar a temperatura de reação, para garantirPCRControle rigoroso dos diferentes pontos de temperatura durante a reação; Tanques de eletroforese: para separaçãoPCRampliação dos produtos; Extrator de ácidos nucleicos: extração totalmente automática de ácidos nucleicos de amostras de tecido. Estes agentes e equipamentos sãoPCRA biologia molecular só pode ser realizada de forma ordenada.PCRreagir e obter resultados precisos.

Os produtos da empresa são apenas para uso em pesquisa científica e não podem ser usados ​​para diagnóstico clínico!

PCRExperimentos básicos relacionados:

PCREtapas básicas da reação A reação em cadeia da polimerase é20Para35Um ciclo é composto por cada um dos seguintes ciclos:3Um passo:

I. Transgênero:

Utilização de alta temperatura (93-98℃Faça uma dupla cadeiaDNASeparação. A alta temperatura conectará os doisDNAA ligação de hidrogênio da cadeia é interrompida. Antes do primeiro ciclo, geralmente é aquecido por um longo período de tempo para garantir que o modelo e o precursor sejam separados e existam apenas na forma de uma única cadeia. Tempo do passo1-2Um minuto, a seguir.PCRO instrumento controla a temperatura para a fase de ciclo.

II. Incendiamento ou junção,Reprodução:

EmDNADepois da separação da dupla cadeia, a temperatura reduzida permite que os primeiros sejam unidos a uma única cadeiaDNAPara cima. A temperatura nesta fase é geralmente inferior ao ponto de fusão do precursor.5℃. A temperatura de cozimento errada pode fazer com que os primeiros não sejam combinados com o modelo ou incorretamente combinados. Tempo do passo1-2Um minuto.

III. Extensão:

DNAA polimerase começa ao longo do precursor ligado ao resfriamentoDNACadeia complementar. A temperatura nesta fase depende daDNAPolimerase. O tempo da etapa depende da polimerase e da necessidade de síntese.DNAcomprimento do fragmento. Tradicional.TaqEstima a síntese1000bp / minMais novoTbr(De Bactérias Termófilas)Termo Brociano(Aproximadamente40Em segundo lugar, a polimerase de fusão produzida por empresas comerciais requer apenas cerca de10-15Um segundo.

Produtos que a empresa está vendendo:Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda Universal do Vírus da Hepatite do PatoVírus da hepatite do pato (DHV)

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda de Vírus da Peste do PatoVírus da peste do pato (DPV)

Kit de PCR quantitativa por fluorescência por sondagem genérica de E. coli (com patogénica e não patogénica)E. coli

Kit de PCR Quantitativa por FluorescençaEchinococcus granulosus (em inglês)

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda UniversalEchinococcus spp.

Kit de PCR Quantitativa por FluorescençaEdwardsiella ictaluri

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda Universal de EdwardsEdwardsiella spp.

Kit de PCR quantitativa por fluorescência com sondagem Edwards retardadaEdwardsiella tarda

RT-1976 (RT-76) Vírus da síndrome da redução dos ovos de galinha RT-1976 Kit de fluorescência quantitativa de PCR por sondagemVírus da síndrome da gota do ovo-1976 (EDSV-76) -1976

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda de Cão ErichEhrlichia canis (em inglês)

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda de Corpo Chafi ErichEhrlichia chaffeensis (em inglês)

Kit de PCR quantitativa por fluorescência com sonda Ferguson ErichEhrlichia fergusonii (em inglês)

Kit de PCR quantitativa por fluorescência por sondagem de Richter ErichEhrlichia risticii

Kit de PCR quantitativa por fluorescência com sonda de Ericsson ruminanteEhrlichia ruminantium

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda Genus ErichEhrlichiae spp.

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda de EckenosisEikenella corrodens

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença de Sonda UniversalEimeria spp.

Kit de PCR quantitativa por fluorescência com sonda de linfocito de óleo de SchierElaeophora schneideri

Kit de PCR Quantitativa por FluorescençaEmmonsia parva

Kit de PCR Quantitativa por FluorescençaEncephalitozoon spp.

Kit de PCR quantitativa por fluorescência com sonda de Amiba em tecido dissolvidoEntamoeba histolytica

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda Universal NeAmibaEntamoeba spp.

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda do Adenvírus Enteral Tipo 41Adenovirus entérico41

Kit de PCR quantitativa por fluorescência com sondagem de E. coli invasiva intestinalE. coli invasiva (EIEC)

Kit de PCR quantitativa por fluorescência por sondagem de E. coli adesiva intestinalEnteroadhesive E.Coli (EAEC)

Kit de PCR Quantitativa por FluorescençaEnterobacter aerógenos

Kit de PCR Quantitativa por FluorescençaEnterobacter cloacae

Kit de PCR quantitativa por fluorescência por sondagem de E. HanasakiEnterobacter sakazaki

Kit de PCR quantitativa por fluorescência de sondagem genérica de E. coliEnterobacter spp.

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda de Enterococco de ChumboEnterococcus casseliflavus

Kit de PCR fluorescente quantitativa por sondagem Endococcal durávelEnterococcus durans

Kit de PCR Quantitativa por FluorescençaEnterococcus faecalis

Kit de PCR Quantitativa por FluorescençaEnterococcus faecium

Kit de PCR Quantitativa por Fluorescença com Sonda Universal para EnterococciEnterococcus spp.

Kit de PCR Quantitativa por FluorescençaEnterocytozoon bieneusi

Kit de PCR quantitativa por fluorescência por sondagem de micrócitos do fígado-intestino do camarãoEnterocitozoon hepatopenei (EHP)

E. coli hemorrágico intestinal O104: Kit de PCR quantitativa por fluorescência com sonda de serotipo H4E. coli enterohemorrágica (EHEC)

PCROtimização das condições de reação:

1Tempo e temperatura da mudança:

Modelo de garantiaDNAO desencadeamento garante todoPCRAmpliação é a chave do sucesso. Aquecimento90~95°C, 30~60sMais complicado.DNAAs moléculas também são variáveis em cadeia única. Temperatura excessiva ou temperatura elevada por muito tempo, pode ser corrigidaTaqAtividade enzimática edNTPMoléculas causam danos.

2Tempo e temperatura múltiplos:

PCRA especificidade da amplificação depende da combinação do primer com o modelo durante o processo de replicação. Quanto maior a temperatura múltipla, maior a especificidade do produto. Quanto menor a temperatura da réplica, menor a especificidade do produto. É necessário basear-se nos primeirosTmvalores específicos.

3Tempo e temperatura prolongados:

Geralmente localizadoTaqTemperatura de ação ideal das enzimas70~75°CEntre. Primário menor que16Quando um nucleótido, a temperatura de extensão excessiva é desfavorável para a ligação do precursor com o modelo, pode ser lentamente aquecido até70~75°C. Tempo de reação prolongado, dependendo do comprimento do segmento a ser ampliado, pode ser menor do que1kb, 1minsuficiente; maior que1kbÉ necessário prolongar o tempo de extensão.TaqAs enzimas podem ser baseadas1kb / minAumentar o tempo. Aqui é importante notar que a ampliação não específica pode ocorrer durante períodos prolongados demais. Portanto, é necessário definir o tempo de extensão adequado.

4Número de ciclos:

Após a seleção de outros parâmetros,PCRO número de ciclos depende principalmente do modeloDNAconcentração. Em teoria.20〜25Após o próximo ciclo,PCRO valor máximo pode ser alcançado pela acumulação de produtos, o rendimento na operação real não pode ser alcançado devido a cada etapa da reação100%Portanto, independentemente da concentração do modelo,20~30Um número mais razoável de ciclos. Quanto mais ciclos, a amplificação não específica aumenta.