RNAsafe ativador RNase eficiente

Os produtos da empresa são apenas para uso em pesquisa científica e não podem ser usados ​​para diagnóstico clínico!

Condições de conservação: -20 ° C para conservar por mais de seis meses.

Introdução do produto:

O RNAsafe contém vários compostos especiais que desativam a RNase e eliminam eficazmente as RNases que podem estar presentes em várias soluções ou tampões de reação, evitando assim a degradação do RNA. O RNAsafe pode ser usado para preparar suspensões de RNA e pode ser adicionado a uma variedade de reagentes de RNA (por exemplo, transcrição in vitro, reversa transcrição, RT-PCR, preparação de sonda, híbrido molecular, ensaio de proteção de nuclease, etc.). Inativar possíveis traces de contaminação com Rnase para manter a estabilidade do RNA e obter melhores resultados experimentais.

Características do produto:

Adequado para uma variedade de tampões, incluindo sistemas de tampões Tris e MOPS que não podem ser tratados pelo DEPC.

Remove com segurança e facilidade as traces de RNase da solução.

A solução tratada pode ser reprocessada a qualquer momento (60 ° C 10-20 min) para remover qualquer contaminação subsequente com RNase que possa ocorrer.

Não afeta a atividade da reversa transcrição, da RNA polimerase e da DNA polimerase resistente ao calor e pode ser usada para a reversa transcrição e as reações de transcrição in vitro.

Não é necessária esterilização por alta pressão após o tratamento.

Uso:

1. Este produto é um concentrado de 20 x, diluir 20 x RNAsafe na solução geral ou tampão de reação a ser tratada para a concentração final de 1 x a concentração de trabalho. Por exemplo, 5 μl de RNAsafe podem ser adicionados a 95 μl de solução a ser tratada.

Tratar a 60 ° C por 20 min para desativar a RNase. A solução tratada com RNAsafe pode ser usada quando arrefecida a temperatura ambiente. A solução tratada pode ser tratada novamente (60 ° C 10-20 min) para remover a contaminação por RNase que pode ocorrer durante o armazenamento. A solução é arrefecida até a temperatura ambiente e adicionada a agentes enzimáticos sensíveis às altas temperaturas, como a transcrase inversa.

PCRQuais reagentes e equipamentos são necessários para a reação?

Reagentes:
ModeloDNA：PCRReação requer modeloDNAextraído de células, tecidos e sangue.DNAetc.; Primário:PCRReação dos dois primeiros, respectivamente, com o modeloDNAAs áreas específicas necessárias para o emparelhamento de ambas as extremidades, os primeiros também podem ser sintetizadosTAPrimários usados ​​em clonagem;dNTPs：PCRSão necessárias quatro reaçõesdNTPsincluindo a desoxiadenotida (ATP(Desoxitimotíde)dCTPDesoxigénitos (dGTP(Ácido desoxicitocínico)dTTPpara a divisão celular,DNAprocessos biológicos, como a síntese, paraPCRModelos expandidosDNAAmpliação e ampliação da cadeia;DNA do TaqPolimerase:PCRPolimerase necessária para a reação, uso geralTaqpolimerase, há outros tipos de polimerase comoPFU、Fusãoetc., para ampliaçãoDNAcadeia;tampão PCRSolução: SimPCRA reação tem um efeito tampão, regulando a reaçãoO pHSal de sulfato de hidrogênioSDSCompostos orgânicos de pequenas moléculas, como formaldeído, podem melhorarPCRespecificidade da reação, aumentando assim a eficiência da reação; Sistema enzimático:PCRA amplificação tende a envolver etapas experimentais como recombinação, construção e sequenciamento, muitas vezes exigindo operações enzimáticas.Marca:Um padrão de peso molecular para distinguirDNAFerramenta do tamanho da peça.DNAKit de purificação: para purificaçãoPCRprodutos de reação;
Equipamento:
PCRInstrumento: usado para controlar a temperatura de reação, para garantirPCRControle rigoroso dos diferentes pontos de temperatura durante a reação; Tanques de eletroforese: para separaçãoPCRampliação dos produtos; Extrator de ácidos nucleicos: extração totalmente automática de ácidos nucleicos de amostras de tecido. Estes agentes e equipamentos sãoPCRA biologia molecular só pode ser realizada de forma ordenada.PCRreagir e obter resultados precisos.

PCRExperimentos básicos relacionados:

PCREtapas básicas da reação A reação em cadeia da polimerase é20Para35Um ciclo é composto por cada um dos seguintes ciclos:3Um passo:

I. Transgênero:

Utilização de alta temperatura (93-98℃Faça uma dupla cadeiaDNASeparação. A alta temperatura conectará os doisDNAA ligação de hidrogênio da cadeia é interrompida. Antes do primeiro ciclo, geralmente é aquecido por um longo período de tempo para garantir que o modelo e o precursor sejam separados e existam apenas na forma de uma única cadeia. Tempo do passo1-2Um minuto, a seguir.PCRO instrumento controla a temperatura para a fase de ciclo.

II. Incendiamento ou junção,Reprodução:

EmDNADepois da separação da dupla cadeia, a temperatura reduzida permite que os primeiros sejam unidos a uma única cadeiaDNAPara cima. A temperatura nesta fase é geralmente inferior ao ponto de fusão do precursor.5℃. A temperatura de cozimento errada pode fazer com que os primeiros não sejam combinados com o modelo ou incorretamente combinados. Tempo do passo1-2Um minuto.

III. Extensão:

DNAA polimerase começa ao longo do precursor ligado ao resfriamentoDNACadeia complementar. A temperatura nesta fase depende daDNAPolimerase. O tempo da etapa depende da polimerase e da necessidade de síntese.DNAcomprimento do fragmento. Tradicional.TaqEstima a síntese1000bp / minMais novoTbr(De Bactérias Termófilas)Termo Brociano(Aproximadamente40Em segundo lugar, a polimerase de fusão produzida por empresas comerciais requer apenas cerca de10-15Um segundo.

PCROtimização das condições de reação:

1Tempo e temperatura da mudança:

Modelo de garantiaDNAO desencadeamento garante todoPCRAmpliação é a chave do sucesso. Aquecimento90~95°C, 30~60sMais complicado.DNAAs moléculas também são variáveis em cadeia única. Temperatura excessiva ou temperatura elevada por muito tempo, pode ser corrigidaTaqAtividade enzimática edNTPMoléculas causam danos.

2Tempo e temperatura múltiplos:

PCRA especificidade da amplificação depende da combinação do primer com o modelo durante o processo de replicação. Quanto maior a temperatura múltipla, maior a especificidade do produto. Quanto menor a temperatura da réplica, menor a especificidade do produto. É necessário basear-se nos primeirosTmvalores específicos.

3Tempo e temperatura prolongados:

Geralmente localizadoTaqTemperatura de ação ideal das enzimas70~75°CEntre. Primário menor que16Quando um nucleótido, a temperatura de extensão excessiva é desfavorável para a ligação do precursor com o modelo, pode ser lentamente aquecido até70~75°C. Tempo de reação prolongado, dependendo do comprimento do segmento a ser ampliado, pode ser menor do que1kb, 1minsuficiente; maior que1kbÉ necessário prolongar o tempo de extensão.TaqAs enzimas podem ser baseadas1kb / minAumentar o tempo. Aqui é importante notar que a ampliação não específica pode ocorrer durante períodos prolongados demais. Portanto, é necessário definir o tempo de extensão adequado.

4Número de ciclos:

Após a seleção de outros parâmetros,PCRO número de ciclos depende principalmente do modeloDNAconcentração. Em teoria.20〜25Após o próximo ciclo,PCRO valor máximo pode ser alcançado pela acumulação de produtos, o rendimento na operação real não pode ser alcançado devido a cada etapa da reação100%Portanto, independentemente da concentração do modelo,20~30Um número mais razoável de ciclos. Quanto mais ciclos, a amplificação não específica aumenta.

Produtos que a empresa está vendendo: