RNAfixer líquido de armazenamento de amostras de RNA sem nitrogênio líquido

Propriedades do produto:

Condições de conservação:

Conservar a temperatura ambiente (18-25 ° C) por mais de 1 ano, se houver precipitação ou precipitação durante o uso, pode ser banho de água de 37 ° C.Usado após a dissolução térmica, a dissolução não afeta a qualidade do produto.
Introdução do produto:
O RNAfixer é um líquido líquido não tóxico para conservação de tecidos que penetra rapidamente no plasma de células de tecido frescoEstabiliza in situ e protege o RNA dentro da célula no estado não congelado. Imediatamente após a remoção da folha de tecido, a imersão na conservação do RNAfixer não afeta a qualidade e a quantidade de RNA extraído no futuro. RNAfixer elimina a necessidade de processamento imediato de amostras de RNAOu a inconveniência de manter o nitrogênio líquido. Após a imersão no RNAfixer, o RNA em células de tecido fresco pode ser intacto emConservar a 37 ° C por um dia, a 25 ° C por uma semana, a 4 ° C por um mês e a longo prazo a -20 ° C ou -80 ° C.
As amostras de vírus de RNA (como HCV e HIV) podem ser conservadas a 37 ° C por um mês.Aplicável a tecidos animais (coração, fígado, rins, músculos, testículos, cérebro, baço, etc.), culturas de células, vírus de RNA, frutosMoscas, bactérias, glóbulos brancos, alguns tecidos vegetais, etc.
Características do produto:
Fácil de operar: organizar no tamanho apropriado e mergulhar no RNAfixer para que seu RNA não seja degradado.
2. sem nitrogênio líquido: fazer a conservação da amostra sem nitrogênio líquido, gelo seco ou geladeiro de -80 ℃, especialmente para amostras clínicas e selvagensRecolha rápida e em massa.
Transporte conveniente: amostras tratadas podem ser mantidas em 25 ° C por uma semana, tornando o envio e o transporte da amostra fáceis e baratos e benéficosCooperação e intercâmbio acadêmicos.
4. congelação múltipla: amostras tratadas por RNAfixer podem ser congeladas repetidamente várias vezes, durante o qual as amostras podem ser tratadas diversamentesem afetar a qualidade do RNA extraído.
Forte comparabilidade: o RNAfixer pode reduzir os erros no processamento de amostras em grande escala e aumentar a comparabilidade entre os experimentos, especialmente útil para a análise de espectros de expressão genética em grande escala.
Instruções de uso:
O RNAfixer é usado apenas para tecidos frescos e é proibido congelar os tecidos antes de mergulhar no RNAfixer. Só precisa de novo rapidamente.Crescimento de tecido fresco, largura, altura, espessura de qualquer lado < 0,5 cm para mergulhar no RNAfixerNo grau não superior a 0,5 cm, o RNAfixer pode penetrar rapidamente, o tamanho dos outros lados não é importante). Agrupar FrescosImersão de tecido Em um RNAfixer de 5 vezes o volume, armazenar a temperatura apropriada de acordo com as instruções.
O RNAfixer de tecido animal não danifica ou dissolve a estrutura do tecido e, portanto, é submerso no RNAfixer para alcançar a penetração.O tecido equilibrado pode ser retirado do RNAfixer, cortado em pedaços menores e colocado de volta no RNAfixer.Continue usando da próxima vez. Órgãos pequenos como o fígado, os rins e o baço do rato não precisam ser cortados e podem ser armazenados inteiros no RNAfixer.
Uso de RNAstore recomendado para diferentes amostras de tecido:

Muitos tecidos vegetais são mergulhados diretamente no RNAfixer, algumas plantas têm barreiras de penetração naturais, como a substância.A camada protetora precisa ser destruída primeiro para facilitar a penetração do RNAfixer.
3. Depois que as células de cultura de tecido são sopradas, colete as células por centrifugação, descarte e lave uma vez com tampão PBS em banho de geloRemover os resíduos de cultura. Suspender as células em uma pequena quantidade de tampão PBS. Adicionar cinco a dez vezes o volume do RNAfixer, misturarTodos.
Para a conservação de glóbulos brancos no sangue inteiro, os glóbulos brancos devem ser separados dos glóbulos vermelhos e do soro, e por grupoDepois de serem tratados como células de cultura de tecido, os glóbulos brancos podem ser mantidos eficazmente no RNAfixer. Não coloque sangue inteiro, plasma.Ou o RNA no soro é mantido no RNAfixer, devido ao seu alto teor de proteína, depois de misturado com o RNAfixer.Fácil formação de precipitação insolúvel.
5. bactérias
As bactérias não podem crescer no RNAfixer, mas o RNAfixer não destrui as bactérias, e a E. coli conserva umO RNA completo ainda pode ser apresentado em meses.
Armazenamento de amostras no RNAfixer:
1. armazenado em -80 ° CConservação de amostras a longo prazo. Coloque a amostra no fixador de RNA a 4 ° C durante a noite e, em seguida, retire a amostra para tentarRemova o líquido RNAfixer limpo e, em seguida, coloque a -80 ° C. Para células de cultura de tecidos, não é necessário removerRNAfixer， Congelado diretamente a -80 ° C, não desintegra as células. A amostra pode ser derretida a temperatura ambiente quando usada, eTambém pode ser congelado novamente sem afetar a integridade e o rendimento do RNA.
2. armazenado em -20 ° CColoque a amostra no RNAfixer a 4 ° C durante a noite e, em seguida, transferir para -20 ° C. As amostras a -20 ° C não são geladas.Congelar, mas pode formar alguns cristales, o que não afeta a extração futura de RNA. As amostras podem ser usadas no quartoA temperatura derrete e também pode congelar novamente sem afetar a integridade e a produção do RNA.
Armazenamento a 4°CAs amostras podem ser armazenadas a 4 ° C por um mês.
4. Armazenar a 25 ° CO RNA da amostra armazenada a 25°C permaneceu intacto durante uma semana e o RNA da amostra armazenada durante duas semanas foi ligeiramente degradado.É pouco útil para análise norte, mas de qualidade suficiente para ensaio de proteção nuclease ou RT-PCR.
Armazenar a 37°CO RNA armazenado em amostras de 37 ° C permaneceu intacto por 24 horas e foi parcialmente degradado em 3 dias.RNAfixer salva a extração de RNA de amostras:A amostra é retirada do RNAfixer e o RNAfixer pode ser derramado diretamente na piscina e lavado com água da torneira.Tratamento especial.
1. Organização
Extrair a amostra do RNAfixer com uma pinça limpa e aspirar um pouco o RNAfixer restante com papel de absorção.O RNA pode ser moído de acordo com o nitrogênio líquido, tal como o tecido fresco, e depois extraído de acordo com o procedimento padrão de homologação.
2. Células
Existem duas opções para as células armazenadas no RNAfixer. Depois de remover o RNAfixer, o RNA é extraído.Um é a extração direta de uma mistura de células e RNAfixer.
Extração do RNA após a remoção do RNAfixerAs células armazenadas no RNAfixer tornam-se menos frágeis e podem suportar altas velocidades de centrifugação sem se fissurarResolução. Temos experiência em coletar células com sucesso em centrifugação de 5000g, devido à diferença de intensidade de cada célula, podePrimeiro, faça um pré-teste com células insignificantes para garantir que a centrifugação não danifique as células à velocidade utilizada. Outra opção.Selecionar um volume igual de PBS diluído antes da centrifugação para diluir a mistura de RNAfixer e células para reduzir a densidade da solução,para que a solução celular possa precipitar.
2) Não remover o RNAfixer, extrair diretamente o RNA
Reagentes de extração em um passo (como TRIpure, reagente TRI) podem também ser adicionados diretamente às células eRNAfixer mistura e, em seguida, siga os passos normais.

PCRPassos e precauções básicas?

I. Princípio experimental

PCRÉ amplificação seletiva artificial in vitro.DNAUm método que é semelhante ao organismoDNAa cópia. no corpo biológicoDNAA cópia requer modelos, primeiros,DNApolimerase,DNADesiclinase,dNTPse fora do corpo;PCRA reação também requer componentes semelhantes, modelos, primeiros,tampão PCR、Taqenzimas,dNTPs. Onde o precursor é uma sequência específica desenhada artificialmente para alcançar a amplificação de uma posição específica;tampão PCRfornecer um ambiente tampão de reação; O processo de reação é o mesmo que no organismo.DNAA dupla cadeia se abre, o precursor combina o modelo e se estende para formar uma nova cadeia. Esses processos estão no organismo.DNADescadeamento da helinase, enquanto in vitro é alcançado através do controle da temperatura da reação. Como usual94℃Modelo de transgêneroDNAAbra a cadeia dupla, junte o introdutor ao modelo a temperatura de cozimento e, finalmente, no72℃Concluir a extensão e repetir o processo repetidamente para realizar segmentos específicosDNAgrande expansão. Só começa o terceiro ciclo.DNAA mesma seçãoDNAMoléculas que produzem alvos mais circularmenteDNAO índice do segmento é duplicado.

Na fase posterior da expansão,Devido à acumulação de produtos,Transforma a reação inicialmente exponencialmente aumentada em uma curva plana,O produto já não aumenta significativamente com o número de ciclos,Isso é chamado de efeito plataforma. Período da plataforma(Plateau)Isso permitirá que os produtos não específicos em baixas concentrações, originados originalmente devido a uma combinação errada, continuem aumentando significativamente para níveis mais elevados. Portanto, o número de ciclos deve ser adequadamente ajustado para terminar a reação antes do período da plataforma e reduzir os produtos não específicos. Período de chegada à plataforma(Plateau)O número de ciclos necessários depende da cópia do modelo na amostra.

II. Principais componentes

1.Os modelos podem ter várias formas, principalmente genomasDNA, partículasDNAO genoma que carrega o vírusDNA、PCRprodutos,ADNcEspere, mas não para...RNAPara os diferentes tipos de modelos, a principal diferença é o tempo de preditividade e a quantidade de modelos. Geralmente para grandes genomasDNATempo preditivo10 minutosBasta. Plasmida.DNA2minO genoma que carrega o vírusDNAPrevisível2 minutos、PCRPredeterminabilidade do produto2 minutosÉ possível.

AtençãoADNcPara cadeia únicaDNAMas ainda é possível.PCRO modelo, apenas na primeira rodada do ciclo, tem apenas um precursor ligado para sintetizar outra cadeia. Desde o início da segunda rodada, ambos os primeiros são combinados com locais específicos, permitindo assimPCRA ligação. como uma cadeia única.RNAMas não é possível.PCRO aumento é devido à realizaçãoPCRA reação éDNAPolimerase. Só identificada deliberadamente.DNAA cadeia.

2.Quanto à quantidade de modelos, geralmente25ulSistemaDNAA qualidade é50100ngpara o genoma.DNADevido à sua estrutura mais complexa, a concentração de extração também tende a ser relativamente grande, para evitar que a concentração seja excessivamente grande.PCRcausando efeitos, a extraçãoDNARealizar diluição gradiental. Caso contrário, concentrações excessivas podem causar amplificações não específicas. Para as partículas ePCRO produto não precisa ser diluído devido à sua estrutura simples e às concentrações de extração geralmente baixas.

Produtos que a empresa está vendendo:

PCRQuais são as questões a serem observadas no experimento??

nãoCTValores

Resultados de teste encontradosCtSituação do valor,Verifique se há os seguintes problemas:

1Número de ciclos insuficiente(Geralmente não mais45Ciclo,Não só o valor de fundo,Quantidade também não.);

2、PCRErro na configuração do programa,Os passos para detectar sinais fluorescentes são errados. GeralSGAdopção da lei72℃Recolha durante a extensãoTaqManAs regras geralmente captam sinais no final do fogo ou durante a extensão.,Se a coleta de fluorescência adicional está selecionada;

3decomposição de primeiros ou sondas. PassávelPáginaDetecção de degradação de precursores e sondas por eletróforese;

4A quantidade do modelo pode se degradar ou ser insuficiente(Não mais.500ng,De acordo com as instruções do kit),As amostras com concentrações desconhecidas devem começar com a concentração mais alta das amostras diluídas em série;Se houver degradação do modelo,Deve-se considerar a introdução de impurezas na preparação da amostra e a ocorrência de congelação repetida.,Recomenda-se que as amostras de modelos sejam divididas em pequenas quantidades,Evite o congelamento repetido;

5A sonda de introdução é adequada(Principalmente, o precursor atravessa os internos.,Para garantir a ampliação do genomaDNA;Atrações para cima e para baixoTmValor superior4℃Isso também afeta a expansão.)。

CTVale tarde demais.

Em quantidade relativa, CtO valor é geralmente controlado1525Melhor entre,Se em quantidade absoluta,Amostras de baixo número de cópiasCtO valor aumentará.,Mas geralmente não é mais do que40Ciclo,Caso contrário, a quantificação é imprecisa.

Portanto...,JulgamentoCtSe o valor aparece tarde demais é anormal,Deve ser realizado de acordo com o projeto e propósito específicos do experimento.

1Ampliação de baixa eficiência. Proporção inadequada entre o primer ou o primer e a sonda,Necessidade de otimização;Projeto não razoável de desenho ou sonda,Precisa de redesenho;

2、PCRProcedimento inadequado,Reagir em três passos,Ou otimizar a recolha/Temperatura prolongada,Temperatura de cozimento pode ser reduzida adequadamente;Incendio/Tempo de extensão curto(Pode ser prorrogado nas condições de tempo recomendadas10s);

3、MgCl2Concentração inadequada,Aumentar a concentração de íons magnésio.PCRDegradação ou quantidade insuficiente de amostragem de vários componentes da reação;

4、PCRO produto é muito longo.PCRDesenho do produto mais500bp;

5Existem inibidores no modelo. Usando modelos de alta purezaPCRDetectar ou diluir o modelo.