Kit de ELISA do fator indutor da apoptose (AIF) em ratos

Kit de teste ELISA do fator indutor da apoptose (AIF) em ratos

Princípio de teste :

Esta caixa de testes de imunoassorção ligada a enzima de centrifugação de bicorpos ( ELISA）。 Em pré-embalagem Fator indutor de apoptose em ratos (AIF)Anticorpos (anticorpos de fase sólida) na placa de microporose, adicionando Fator indutor de apoptose em ratos (AIF) Calibração e amostras a serem testadas, adicionando outra linhagem Resistência ao marcador HRP Fator indutor de apoptose em ratos (AIF) (anticorpos enzimáticos), após a temperação e lavagem adequada, remover os componentes não ligados e formar anticorpos de fase sólida na superfície da placa microporosa - Antígeno-enzima-marcado anticorpo complexo de clamp. Substratos A e B, o substrato produz um produto azul sob a catálise de HRP e, finalmente, se transforma em amarelo sob a ação de um líquido terminal (ácido sulfúrico 2M) para medir a absorção (OD), a absorção (OD) e a amostra a ser testada em um calibrador enzimático de 450 nm Fator indutor de apoptose em ratos (AIF)A concentração está relacionada. Adapta-se à curva de calibração, pode ser calculado na amostra Ratos (AIF)concentração.

Equipamento e reagentes necessários

1、 Marcador enzimático (comprimento de onda do filtro 450nm)

2、Termostato a 37°C (não é recomendado o uso de um cultivo de CO2 para células)

3、 Máquina de lavar placas automática ou pipeta multicanal / 5ml goteira (para lavagem manual)

4、 Estéril. Tubo EP e sucção única

5、 Unicanal de precisão (0,5-10μL, 5-50μL, 20-200μL, 200-1000μL) e pipetas multicanal (calibração necessária antes de usar o pipeta).

6、Papel de absorção de água e tanques de amostragem

7、Água desionizada ou destilada

Composição do kit:

Coleta de amostras :

1、Os tubos de ensaio para coleta de sangue devem ser de uso único sem termogênio e sem endotoxinas.

2、 Anticoagulantes de plasma recomendados EDTA 。 Evite o uso de amostras hiperlipídicas e hemolíticas.

3、A amostra deve ser clara e transparente e a suspensão deve ser removida por centrifugação.

4、 Se a amostra não for detectada a tempo após a coleta, por favor, divide-a por uma vez e congele-a em -20 ℃, -70 ℃ dentro do frigorífico elétrico, para evitar o congelamento repetido, detecção dentro de março a junho.

5、 Se a concentração do teste em sua amostra for superior ao valor máximo do produto padrão, por favor, de acordo com as circunstâncias reais, Faça diluição múltipla adequada (Recomenda-se um pré-experimento para determinar o múltiplo de diluição).

Condições de armazenamento:

Coleta e conservação de amostras：

1、 Colocação de amostras de sangue total de soro a temperatura ambiente 2 horas ou 2-8 ° C durante a noite. Centrifugar 1000 x g durante 20 minutos e remover. Pode ser detectado imediatamente ou congelado a -20°C ou -80°C por dose única.

2、 Anticoagulantes de plasma recomendados EDTA-Na2/K2， A amostra foi retirada a 2-8 ° C durante 30 minutos após a coleta e centrifugada por 1000 x g durante 15 minutos. Detecta-se imediatamente ou congela-se a -20°C ou -80°C por dose única. Consulte as instruções de preparação da amostra para uso e seleção de outros anticoagulantes.

3、amostra de tecido amostras de tecido geralmente são feitas homogênea de tecido, o tratamento é como segue:
3.1、 Coloque o tecido alvo no gelo, com pré-frio. O tampão PBS (0,01 M, pH = 7,4) é lavado para remover o sangue residual e pesado para reposição.

3.2、 Moa o tecido no gelo com um lito. O volume de crete adicionado depende do peso do tecido, geralmente cada 1g de fragmentos de tecido usando 9 ml de crachado. Também é recomendado adicionar inibidores de protease, como PMSF 1mM, ao lito.

3.3、 Pode ser reutilizado para ultra-som quebrado ou congelamento repetido para processamento adicional (Durante o processo de quebra por ultra-som, um banho de gelo é necessário para resfriar; o método de congelamento repetido pode ser repetido 2 vezes).

3.4、 Coloque a solução preparada em Centrífuge 5.000 x g durante 5 minutos e deixe-o para ser detectado. Ou congelar a -20°C ou -80°C por dose.

3.5、 De acordo com as necessidades experimentais, a amostra de homologação de tecido pode primeiro determinar a concentração total de proteína Para facilitar a análise de dados, o método BCA é recomendado. Normalmente, a concentração total de proteína é ajustada para 1-3 mg/ml para o teste ELISA. Algumas amostras de tecido, como fígado, rins e pâncreas, contêm concentrações mais altas de peroxidase endógena e podem reagir com substâncias coloridas em altas concentrações. Você pode tentar usar 1% H2O2 para desativação por 15 min.

Atenção: Liquidos frequentemente usados Tampon PBS, ou usar um lito RIPA de intensidade média. Quando usado, o PH deve ser ajustado para PH7.3, evitando o uso de componentes que contenham NP-40, Triton X-100 e DTT, o que pode inibir gravemente o trabalho do kit. Recomenda-se o uso de 50mM Tris + 0,9% NaCL + 0,1% SDS, PH 7,3, pode ser preparado por conta própria ou contate-nos para comprar.

4、 culturas celulares para coletar líquido, 2-8 ° C, 2500 rpm por centrifugação para 5 min, coletar clarificação sobre a cultura celular. Para uso imediato na detecção ou em reposição congelada a -80°C por uso único.

5、Liquido de fissão celular

5.1、 Recolha e fissão de células suspensas: 2-8 ° C, 2500rpm centrífuga 5min, coleta de células. Adicione o PBS pré-refrigerado e misture suavemente para limpar, 2-8 ° C, 2500rpm para centrifugar em 5min e coletar as células. Adicionar 0,5-1ml de solução celular e uma quantidade moderada de inibidores de protease (por exemplo, PMSF, concentração de trabalho de 1mmol / L), colocar no gelo, dissolver 30min-1h, ou combinado com ultra-som de ruptura.

5.2、 Recolha e fissão das células: absorver o líquido superior e adicionar pré-refrigerado Lave o PBS três vezes. Adicione 0,5-1 ml de solução celular e uma quantidade moderada de inibidores de protease (por exemplo, PMSF, concentração de trabalho de 1 mmol / L) para raspar as células suavemente e raspar as células da parede. A suspensão celular é transferida para um tubo centrífugo, colocado no gelo e quebrado em 30min-1h, ou combinado com ultra-som para quebrar.

5.3、 O tubo centrífugo pode ser soprado ou agitado intermitentemente com a cabeça da arma durante a fissão celular para que a proteína se fisse completamente A viscosidade é o DNA, que pode ser quebrado com ultra-som. (Ou usar uma sonda de ultra-som de 3-5mm, potência de 150-300W, amostras de tratamento de ultra-som no gelo, trabalhar por 1-2 segundos, parar por 30 segundos, 3-5 ciclos.) )

5.4、 fissura ou ultra-som quebrar concluído, 2-8°C, 10.000 rpm por centrifugação em 10 min, transferência de alta clareza para tubos EP para uso imediato na detecção ou congelamento de reposição a -80°C por uso único.

Kit de teste ELISA do fator indutor da apoptose (AIF) em ratos

Atenção:Observações e amostras de tecido.

Nota: Aqui é apenas para referência! Espero que as informações acima ajudem você a fazer a escolha certa!