T0P10感受态细胞*

Células sensíveis T0P10*
Nome do produto: *0 Chemically Competent Cell
Número do produto: G6015-20 (20 100ul), G6015-100 (100 100ul)
Especificações / Introdução: G6015-20 (20 100ul), G6015-100 (100 100ul)

Genéticatipo

O F- mcrA△(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ△M15△lacX74 recAl ara△139△(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

Breve descrição：

A cepa T0P10, derivada da cepa MC1061, é uma das células sensíveis atualmente usadas em laboratório e tem um genótipo muito semelhante ao DH10B (DH10B é o tipo galE15 e T0P10 é o tipo galU). A taxa de crescimento do CLBio *0 é rápida (mais rápida do que DH5a, mas mais lenta do que Mach1-T1), com clonagem visível de 10 horas, mutações em recA1 e endA1 favorecem a extração de DNA plasmódico estável e de alta pureza do DNA inserido. Pode ser usado para a construção de clonagem, triagem de manchas azuis e brancas e outros experimentos, com resistência à cadeia **. Células sensíveis T0P10 da série CLBio são produzidas por um processo especial, com eficiência de conversão > 108cfu / μg por meio de teste de plasmódio pUC19.

Instruções de funcionamento:

1. As células do estado sensível CLBio * 0 são colocadas no gelo para derreter (ou soltar a mão ou a temperatura ambiente por um momento, até que as bactérias estejam rapidamente inseridas no gelo quando estiverem em um estado de mistura de água gelada), adicionar o DNA de destino (plasmídeo ou produto de conexão) e misturar suavemente com a mão no fundo do tubo EP e deixar no gelo por 25 minutos.

O banho de água de 2,42 ° C é aquecido por 45 segundos, colocado rapidamente de volta no gelo e deixado em reposo por 2 minutos, o agitação diminuirá a eficiência da conversão.

Adicione 700 μ1 de meio estéril 2YT ou LB sem antibióticos ao tubo centrífugo, após mistura a 37 ° C, 200 rpm para recuperação por 60 minutos.

4.5000rpm centrifugar por um minuto para recolher bactérias, deixar cerca de 100μ1 suavemente soprar sobre a ressuspensão de blocos e revestir sobre o meio de cultura 2YT ou LB contendo os antibióticos correspondentes.

Coloque o comprimido invertido em uma incubadora de 37 ° C durante a noite. Se uma operação de triagem de manchas azuis e brancas for realizada, coloque o comprimido em cultura a 37 ° C por pelo menos 13 h.

Atenção：

Células sensíveis CLBio derretem no gelo. Coloque-o no gelo por cerca de 5 minutos para derreter e adicione o plásmido dentro de 8 minutos após o derretimento, caso contrário, afetará a eficiência da conversão.

2. deve ser usado suavemente ao misturar plasmidos ou conectar produtos.

A conversão de alta concentração de plasmídeos ou produtos de conexão de alta eficiência pode reduzir a quantidade de bactérios usados ​​em placas de revestimento.

Células sensíveis T0P10*