TRzol (Reagente de extração de RNA total) (vermelho)

Os produtos da empresa são apenas para uso em pesquisa científica e não podem ser usados ​​para diagnóstico clínico!

O reagente TRzol é um reagente que extrai o RNA total diretamente de uma célula ou tecido. Mantém a integridade do RNA ao quebrar e dissolver as células. Após a adição de cloroformo, a amostra é dividida em camadas hidrográficas e orgânicas. O RNA está presente na camada de água. Após a coleta da amostra acima, o RNA pode ser recuperado através da precipitação de isopropanol.

Seja humano, animal, planta ou tecido bacteriano, este método tem um melhor efeito de separação para pequenas e grandes quantidades de tecidos e células. A simplicidade de operação do reagente TRzol permite o processamento simultâneo de várias amostras. Todas as operações podem ser realizadas em uma hora. O RNA total extraído pelo TRzol evita a contaminação do DNA e das proteínas. Portanto, é possível fazer análise de impressão de RNA, cruzamento de manchas, seleção de poli(A)+, transcrição in vitro, análise de proteção enzimática de RNA e clonagem molecular.

O reagente TRzol facilita a separação de vários tipos de RNA de diferentes tamanhos moleculares. Por exemplo, o RNA extraído do fígado de ratos através de eletroferese em gel de gonadotase e tingido com lintegas de bromuro de beta, mostrou muitas faixas discontínuas de alto peso molecular entre 7 kb e 15 kb (componentes de mRNA e hnRNA), dois ribosomas vantajosos ~5kb (28S) e ~2kb (18S), e RNA de baixo peso molecular entre 0,1 e 0,3kb (tRNA, 5S). Quando o RNA extraído é diluído com TE, sua relação A 260 / A 280 é ≥ 1,8.

Armazenamento do produto: o TRzol pode ser mantido de forma estável a temperatura ambiente por 12 meses. No entanto, para obter os melhores resultados, recomendamos conservar em um ambiente de 2-8 ° C.

Quais reagentes e equipamentos são necessários para a reação de PCR?

Reagentes:
DNA modelo: a reação de PCR requer DNA modelo, como extração de DNA de células, tecidos, sangue, etc. Primário: dois primeiros da reação de PCR, respectivamente, para emparelhar as duas extremidades do DNA do modelo para ampliar a área específica necessária, o primeiro também pode ser sintetizado para ser usado em clonagem de TA e outros processos; dNTPs: quatro tipos de dNTPs são necessários em reações de PCR, incluindo desoxiadenótida (dATP), desoxitimotída (dCTP), desoxiaviotida (dGTP) e ácido desoxicitocínico (dTTP), para processos biológicos como divisão celular, síntese de DNA e extensão e amplificação de cadeias de DNA modelo para amplificação de PCR; Taq DNA polimerase: a polimerase necessária para a reação de PCR, geralmente a polimerase Taq é usada, e há alguns outros tipos de polimerase, como PFU, Phusion, etc., para ampliar a cadeia de DNA; Solução tampão de PCR: tem um efeito tampão para a reação de PCR, regula o pH da reação, sulfato de hidrogênio SDS, compostos orgânicos de pequenas moléculas como formaldeído, pode melhorar a especificidade da reação de PCR, melhorando assim a eficiência da reação; Sistemas de corte enzimático: a amplificação de PCR tende a envolver etapas experimentais como recombinação, construção e sequência, muitas vezes exigindo operações de corte enzimático. MARK: um padrão de peso molecular usado para determinar o tamanho de fragmentos de DNA. Kit de purificação de DNA: para purificação de produtos da reação de PCR;
Equipamento:
Método de PCR: usado para controlar a temperatura da reação, para garantir o controle rigoroso de diferentes níveis de temperatura durante a reação de PCR; Tanque de eletróforese: usado para separar produtos de amplificação de PCR; Extrator de ácidos nucleicos: extração totalmente automática de ácidos nucleicos de amostras de tecido. Estes reagentes e dispositivos são usados ​​na tecnologia de biologia molecular de PCR e somente em uma base bem ordenada podem realizar a reação de PCR e obter resultados precisos.

Experimentos básicos relacionados à PCR:

A reação em cadeia da polimerase consiste de 20 a 35 ciclos, cada um com as seguintes 3 etapas:

Um,Alteração:

A separação de DNA de dupla cadeia é feita a partir de altas temperaturas (93-98 °C). Altas temperaturas interromperão as ligações de hidrogênio que ligam as duas cadeias de DNA. Antes do primeiro ciclo, geralmente é aquecido por um longo período de tempo para garantir que o modelo e o precursor sejam separados e existam apenas na forma de uma única cadeia. A etapa dura 1-2 minutos e o PCR entra na fase de ciclo com a temperatura controlada.

II, cozimento ou ligação, multiplicação:

Após a separação da dupla cadeia do DNA, a temperatura reduzida permite que o precursor se ligue ao DNA de cadeia única. A temperatura nesta fase é geralmente inferior ao ponto de fusão do precursor de 5 ° C. A temperatura de cozimento errada pode fazer com que os primeiros não sejam combinados com o modelo ou incorretamente combinados. A etapa dura 1-2 minutos.

III. Extensão:

A polimerase de DNA começa a sintetizar cadeias complementares ao longo da cadeia de DNA por meio do precursor ligado ao arrefecimento. A temperatura nesta fase depende da DNA polimerase. O tempo da etapa depende da polimerase e do comprimento do fragmento de DNA que precisa ser sintetizado. O Taq tradicional estima que a síntese dura 1.000 bp/min, o Tbr mais recente (do termofílio Thermus brockianus) cerca de 40 segundos, e a polimerase de fusão produzida por empresas comerciais leva apenas cerca de 10 a 15 segundos.

Otimização das condições de reação PCR:

Temperatura e Tempo de Transgênero:

Garantir o desencadeamento do DNA do modelo é a chave para garantir o sucesso de toda a amplificação da PCR. Aquecer 90 ~ 95 ° C, 30 ~ 60s, e moléculas de DNA complexas também podem ser modificadas para cadeia única. Temperaturas elevadas ou prolongadas podem danificar a atividade da enzima Taq e as moléculas dNTP.

Tempo e temperatura múltiplos:

A especificidade da amplificação de PCR depende da combinação do precursor com o modelo durante o processo de replicação. Quanto maior a temperatura múltipla, maior a especificidade do produto. Quanto menor a temperatura da réplica, menor a especificidade do produto. Deve ser definido especificamente de acordo com o valor Tm do inicial.

Tempo e temperatura de extensão:

Geralmente localizado na temperatura de ação ideal da enzima Taq entre 70 e 75 ° C. Quando o precursor é menor que 16 nucleótidos, a temperatura de extensão excessiva é desfavorável para a ligação do precursor com o modelo, pode ser lentamente aquecido até 70 ~ 75 ° C. O tempo de reação de extensão pode ser menor que 1kb, 1min o suficiente, dependendo do comprimento do segmento a ser amplificado; Mais de 1kb requer um tempo de extensão maior. A enzima Taq pode aumentar o tempo de acordo com 1kb / min. Aqui é importante notar que a ampliação não específica pode ocorrer durante períodos prolongados demais. Portanto, é necessário definir o tempo de extensão adequado.

4 Número de ciclos:

Depois de outros parâmetros serem selecionados, o número de ciclos de PCR depende principalmente da concentração do DNA do modelo. Em teoria, após 20 a 25 ciclos, a acumulação de produtos de PCR pode atingir o valor máximo, na prática, devido à taxa de rendimento de cada etapa da reação não pode atingir 100%, por isso, independentemente da concentração do modelo, 20 a 30 vezes é o número de ciclos mais razoável. Quanto mais ciclos, a amplificação não específica aumenta.

Produtos que a empresa está vendendo:

O TRzol(Total) RNA Reagentes de extração)( vermelho )	Kit de teste de ácido nucleico genético HA do vírus da gripe Pandemic2009H1N1	Caixa de teste de conteúdo de coenzima I NAD(H) (comparação de coloração)
O TRzol(Total) RNA Reagentes de extração)( Sem cor )	Kit de teste de ácido nucleico genético do subtipo HA do vírus da gripe sazonal H3N2	NADquinase (NADKCaixa de teste (comparação de cores)
TRzol LS(amostras líquidas) RNA Reagentes de extração)	Kit de teste de ácido nucleico HA do subtipo H7N9	Caixa de teste de deshidrogenase láctica (LDH) (cromatografia)
RNApuro Total ultrapuro RNA Kit de extração rápida (DNase I)	Kit de teste de DNA para o subtipo H7N9 NA	Caixa de teste de deshidrogenase de macato de NAD (NADMDH)
O EASYspin Sangue completo RNA Kit de extração rápida (DNase I)	Kit de teste de ácido nucleico do vírus da gripe B	Caixa de teste de deshidrogenase de macato de NADP (NADPMDH)
O EASYspin organização / Células RNA Kit de extração rápida (DNase I)	Kit de teste de ácido nucleico do vírus da gripe tipo B Yamagata	Caixa de teste de redutase coenzima Q do complexo de cadeia respiratória mitocondrial I/NADH (colorimetria)
O EASYspin planta RNA Kit de extração rápida (DNase I)	Kit de teste de ácido nucleico do vírus da gripe B Victoria	Caixa de teste de oxidase NADH (NOX)
PLANTaid planta RNA Auxiliares	Kit de teste de ácido nucleico da cepa do vírus H7N9 (HPAI-H7)	Caixa de teste de cítrica sintase (CS) (cromatografia)
Genoma do vírus ADN/ARN Kit de extração rápida	Kit de teste de ácido nucleico genético do subtipo HA do vírus da gripe sazonal H1N1	Caixa de teste de teor de etanol (colorimetria)
RNA limpo RNA Kit de purificação limpa	Kit de teste de ácido nucleico do vírus da gripe tipo C	Deshidrogenase de etanol (ADHCaixa de teste (comparação de cores)
Fixador de RNA Sem nitrogênio líquido RNA Liquido de armazenamento de amostras	Kit de teste de ácido nucleico do vírus da gripe aviar suína eurasiática (EA-H1N1)	Caixa de teste de formaldehidase deshidrogenase (FDH) (cromatografia)
Isso é seguro. Eficiente RNase Ativador	Kit de teste de ácido nucleico para vírus da gripe A / vírus da gripe B	Caixa de teste de deshidrogenase de acetaldeide (ALDH) (colorimetria)
RNA longo RNA Liquido de conservação a longo prazo	Kit de teste de ácido nucleico do subtipo H7N9 / contém marcadores internos	Coenzima IINADP(H)Caixa de teste de conteúdo (colorimetria)
RNase longe Tipo de força RNase Ativador	Kit de teste de ácido nucleico do subtipo H3N2 do vírus da gripe sazonal	Caixa de teste de NADPase (colorimetria)