Teste de proliferação celular e toxicidade ZETA LIFE - Kit CCK

Teste de proliferação celular e toxicidade ZETA LIFE - Kit CCK

Preço: ¥615 - 2800

Marca:Vida ZETA.

Número da mercadoria:K009

Origem:EUA

Fornecedores:XangaiLeitongBiotecnologia Co., Ltd.

quantidade:1000

Nome em Inglês: cck8

Período de validade24 meses

Salvar CondiçõesConservação: 4°C

especificação:500T-3000T

Teste de proliferação celular e toxicidade ZETA LIFE - Kit CCK

O Kit CellCounting, abreviado como Kit CCK, é um kit de teste rápido de alta sensibilidade baseado em WST (sal monosódico de tetrazol solúvel em água, nome químico: 2- (2-Metoxi-4-Nitrofenil) -3- (4-Nitrofenil) -5- (2,4-Disulfobenzo) -2H) amplamente utilizado para proliferação celular e citotoxicidade.

O CCK é uma alternativa atualizada para a MTT e tem vantagens claras em comparação com a MTT ou outros produtos semelhantes à MTT, como o XTT. MTS, etc.:

O formazano reduzido pela deshidrogenase na mitocôndria é solúvel em água, não precisa de solução específica para se dissolver, e o formazano produzido pelo WST e XTT, MTS não é solúvel em água, portanto, pode ser evitado os passos de dissolução posteriores.

O CCK é mais estável do que o XTT e o MTS, tornando os resultados experimentais mais estáveis.

CCK e MTT, XTT, etc. têm uma gama mais ampla e maior sensibilidade do que a linearidade.

Comparação entre o método CCK e outros métodos de teste:

Instruções:

Criação de curvas padrão (ao determinar o número específico de células)

Primeiro, use a placa de contagem de células para contar o número de células na suspensão celular preparada e, em seguida, vacine as células.

2, de acordo com a proporção (por exemplo: proporção 1/2) diluído em um gradiente de concentração celular, geralmente 3-5 gradientes de concentração celular, cada grupo de 3-6 poros compostos.

3, cultivo após a vacinação por 2-4 horas para que as células se apeguem à parede, em seguida, adicione a cultura de reagente CCK - determina o valor de OD após o tempo, para produzir uma linha com o número de células como coordenadas transversais (eixo X),

O valor OD é a curva padrão das coordenadas longitudinais (eixo Y). Com base nesta curva padrão, o número de células de amostras desconhecidas pode ser determinado (esta curva padrão é testada desde que as condições do experimento sejam

facilita a determinação do número de células vacinadas e do tempo de cultivo após a adição do CCK).

Teste de atividade celular

Vacinar a suspensão celular em uma placa de 96 buracos (buracos de 100 ul). Coloque a placa em um recipiente para pré-cultura (em 379C, 5% de CO2).

Adicione 110ul de solução de CCK a cada buraco (note que não genere bolhas no buraco, elas afetarão a leitura do valor de OD).

Incubar a placa no recipiente por 14 horas.

Determine a absorção de luz a 450 nm com um calibrador enzimático.

Se o valor do OD não for medido temporariamente, com a intenção de medir mais tarde, pode ser adicionado 10 ul de solução de HCL de 0,1 M ou solução de SDS de 1% wIv a cada buraco e cobrir a cultura.

A placa é mantida à temperatura ambiente. A absorção não muda em 24 horas.

Valor agregado celular - teste de toxicidade

Configure 100u de suspensão celular em uma placa de 96 buracos. A placa de cultivo é pré-cultivada em um compartimento de cultivo por 24 horas (em 379C, 5% de CO2).

Adicione 10 ul de substâncias a serem testadas em diferentes concentrações à placa de cultura.

Incubar a placa no recipiente por um período apropriado (por exemplo, 6, 12, 24 ou 48 horas).

Quer adicionar uma solução de CCK de 10ul a cada buraco (cuidado para não gerar bolhas no buraco, eles afetarão a leitura do valor de OD).

Incubar a placa no recipiente por 1-4 horas.

Determine a absorção de luz a 450 nm com o calibrador enzimático.

Se o valor de OD não for medido temporariamente, com a intenção de ser medido mais tarde, pode ser adicionado 10 ul de solução de HCL de 0,1 M ou solução de SDS de 1% wIv a cada orifício, e cobrir a placa de cultivo para evitar a luz em condições de temperatura ambiente. A absorção não muda em 24 horas.

NOTA: Se a substância a ser testada for oxidativa ou redutiva, o meio fresco pode ser substituído antes da adição do CCK (remover o meio e lavar as células duas vezes com o meio e, em seguida, adicionar um novo meio) para remover o efeito da droga. É claro que o efeito da droga é relativamente pequeno, não pode substituir o meio de cultura, deduzindo diretamente a absorção em branco do meio de cultura após a adição da droga.

Preparação:

①Recomenda-se primeiro fazer alguns buracos para explorar o número de células vacinadas e o tempo de cultura após a adição do reagente CCK.

②Em circunstâncias condicionais, o uso de um pipete multicanal é recomendado para reduzir a diferença de redução de orifícios paralelos. Inscrever

Quando o reagente CCK é recomendado para adicionar a parede da placa de cultura inclinada, não inserir a página do meio de cultura para adicionar, é fácil gerar bolhas, interferirá com a leitura do valor do OD.

③Os glóbulos brancos podem precisar de cultivo por mais tempo.

④Quando uma placa de 96 buracos padrão é usada, a pequena quantidade de vacinação de células de parede é de pelo menos 1.000 / L de buraco (meio de cultura de 100u). A sensibilidade ao detectar glóbulos brancos é relativamente baixa, por isso

A quantidade recomendada de vacinação não é inferior a 2500 poros/F (100ul de meio). Se você quiser usar uma placa de 24 poços ou uma placa de 6 poços para o experimento, primeiro calcule a quantidade de vacinação correspondente por poço e adicione a solução CCK em 10% do volume total do meio por poço.

⑤Se não houver um filtro de 450 nm, você pode usar um filtro com absorção entre 430 e 490 nm, mas a sensibilidade de detecção do filtro de 450 nm é maior.。

⑥A absorção do fenol vermelho no meio de cultura pode ser eliminada ao calcular, deduzindo a absorção do fundo no buraco em branco, portanto, não afeta a detecção.

Cálculo:

Vitalidade celular* (%) =[A (adição) -A (em branco)]/[A (adição 0) -A (em branco)]x100

A (administração): absorção de orifícios com células, soluções CCK e soluções farmacêuticas

A (vazio): absorção de orifícios com meio de cultura e solução CCK sem células

A (dose 0): absorção dos orifícios com células, solução CCK e sem solução farmacêutica

* Vitalidade celular: proliferação celular ou vitalidade citotóxica

Condições de salvamento:

49C para conservação à luz, válido por um ano.

NOTA: Não pode ser usado em tratamento clínico.