pU6-Ets2(mouse)-sgRNA3-Cas9-EGFP

Observação: Antes da conversão, procure exatamente o nome do antibiótico correspondente ao plasmido, a concentração de uso de antibiótico, o nome do estado de sensibilidade e a temperatura de cultivo.

1Depois de receber o pó seco, por favor5000rpmCentrífuga1 minutoJunte-se novamente.20μl ~ 50μlÁgua estéril oupH 8,0de1 * TETampon para dissolver o plasmido, colocado a temperatura ambiente1 minuto；

2, de-80℃Tire o estado de sensação correspondente do frigorífico, coloque-o na caixa de gelo para descongelar e marcar bem;

3、 取2μlPlasmida adicionada a100μlSentimentos, banho de gelo30 minutos；

4、42℃Quenteanos 90Mais um banho de gelo.2 minutos；

5Inscreva-se900 μlIrresistível.LBmeios de cultura líquidos,180rpmCultura de choque45 minutos；

6、6000rpmCentrífuga5 minutosSó ficar.100ulprecipitação de micróbios misturados;

7O micróbio misturado aumenta a resistênciaLBEm uma placa plana, derrame a quantidade apropriada de pérolas de vidro e revesta o líquido;

8Cultivar o tablet em direção1 horacultivo inverso.12h~16h；

9Selecionar colônias monoclonais para resistência correspondenteLBCultura de choque em meio líquido12h~16hextração de plasmídeos de acordo com a necessidade experimental