RT SuperMix tudo-em-um para qPCR 试剂

Condições de armazenamento

-20℃

Composição do produto

RT SuperMix tudo-em-um para qPCR 试剂

Perfil do produto

O All-in-One RT SuperMix para qPCR (com dsDNase) é um kit de síntese de cDNA de cadeia de alta qualidade eficiente, conveniente e com redução de poluição que contém todos os componentes necessários para a síntese de cDNA de cadeia, como a M-MLV GIIIReverse Transcriptase e seu tampão de reação, inibidores de enzimas de RNA, dNTPs, Oligo(dT)20VN e iniciadores aleatórios, com a adição de um modelo de RNA e água para iniciar a reação. O All-in-One RT SuperMix for qPCR (withdsDNase) é um kit de síntese de cDNA em cadeia atualizada que obtém até 12 kb de cDNA em 15 minutos, o produto pode ser usado em experimentos como qPCR, PCR normal, etc. O RNA extraído de tecidos ou células tende a contaminar o DNA genômico residual e, se a remoção não for feita antes da transcrição, o DNA genômico e o cDNA serão amplificados simultaneamente durante a reação qPCR downstream, especialmente quando o desenho do precursor está no mesmo exônio, afetando a precisão quantitativa. A dsDNase utilizada neste kit é capaz de digerir específicamente DNA de dupla cadeia ou DNA de dupla cadeia hibridada de DNARNA e é sensível ao calor e pode ser desativada de forma rápida e irreversível a temperaturas de reação de retrotranscrição. Em comparação com os métodos tradicionais que permitem que a DNase I remova a contaminação do DNA genômico, a dsDNase não precisa adicionar mais EDTA para ser desativada, economizando não apenas tempo experimental, mas também reduzindo a inibição da resposta de retrotranscrição. Dependendo da gravidade da poluição do DNA genômico, a poluição do DNA genômico e a transcrição podem ser selecionadas separadamente ou o método operacional de poluição do DNA genômico e a transcrição.

Uso

Amostras de RNA para DNA genômico baixo (esquema recomendado)

RT SuperMix tudo-em-um para qPCR 试剂

Prepare o seguinte sistema de reação no gelo:

Recomenda-se o uso de RNA de alta qualidade extraído do kit como modelo.

② suavemente sucto misturado, instantâneo;

Cultivar a temperatura de 37 ° C por 2 min para remover a contaminação do DNA do genoma;

Temperatura de 55°C 15 min;

Após o fim da reação, 85 ° C 2 min para terminar a reação;

Colocar rapidamente o cDNA obtido no gelo para experimentos posteriores; Conservar imediatamente a -20°C.

Amostras de RNA altas para DNA genômico

Remoção da contaminação do DNA genômico

Prepare o seguinte sistema de reação no gelo:

Recomenda-se a utilização de RNA extraído do kit como modelo.

② suavemente sucto misturado, instantâneo;

Cultivar a temperatura de 37 ° C por 2 min para remover a contaminação do DNA do genoma;

NOTA: Se o DNA genômico no RNA for contaminado de forma grave, o tempo de incubação pode ser prolongado adequadamente a 37°C para 5 minutos.

Cultivar a temperatura de 65 ° C por 2 min para desativar a dsDNase e, em seguida, colocar no gelo.

Síntese do cDNA da primeira cadeia

Prepare o seguinte sistema de reação no gelo:

② suavemente sucto misturado, instantâneo;

Criação a temperatura de 50°C por 15 minutos;

NOTA: Se o RNA alvo não contém a estrutura Poly(A), pode ser pré-criado a 25°C por 10 min.

Após o fim da reação, 85 ° C 2 min para terminar a reação;

Coloque a solução de cDNA obtida no gelo para experimentos posteriores.

Nota: a solução de cDNA é armazenada a -20 ° C, recomendado não mais de 1 semana; Pode ser armazenado a -80°C a longo prazo.

Precauções

A pré-mistura já contém Oligo(dT)20VN e precursores aleatórios e é adequada não apenas para mRNA eunuclíaco que contém a estrutura Poly(A), mas também para modelos como RNA protonuclear, rRNA eunuclíaco e tRNA que não contêm a estrutura Poly(A), mas não para modelos de RNA pequenos como miRNA.

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