Espectroscopia gelatinosa MMP (2/9)

Espectroscopia gelatinosa MMP (2/9)

Zymography (Zymography) O método de protease baseado em eletroferese SDS-PAGE e coloração em gel de fase inversa detecta a atividade de MMP-2 e MMP-9 com sensibilidade de até 10 pg, superior ao método ELISA.

Os princípios e procedimentos básicos são: separar amostras contendo protease com gel SDS-PAGE adicionado com substrato de colagenase, remover o gel após o término da eletróforese e incubar com o tampão de reação enzimática, manchar e descolorir o gel. O gel é profundamente manchado devido à proteína do substrato, formando um fundo escuro, mas na posição de uma faixa de protease, a protease degradará a proteína do substrato no gel e, portanto, não é manchada e formará uma área transparente, que pode indicar simultaneamente a localização de MMP-2, MMP-9 (espectro enzimático), pode detectar amostras de sangue, líquido filtrante, extratos celulares, etc.

Período de serviço: 10 dias úteis

Os resultados fornecem: relatórios de resultados, imagens representativas, processos operacionais e informações sobre os instrumentos de reagentes relevantes.

Espectroscopia gelatinosa MMP (2/9)Conhecimento da amostra:

1) O cliente informa o agrupamento experimental, a numeração e os dados de projeto de fundo, os requisitos específicos devem ser explicados com antecedência;

2) Coleta, conservação e transporte de espécimes:

① amostra de tecido: tecido fresco colocado em nitrogênio líquido ou -70 graus de conservação, tecido não inferior a 100mg;

② Cultura de células: através da contagem celular, tome não menos de 2x106 células em tubos EP, adicione 0,5 ml de água salina fisiológica, mantenha-a no frigorífico após mistura (-70 ° C, para evitar o congelamento repetido);

3. amostras de células sanguíneas: preservar amostras de sangue com anticoagulante ou separar células com a separação de linfocitos adicionando 0,5 ml de água salina fisiológica, conservar (-70 ° C pode ser conservado a longo prazo, para evitar o congelamento repetido)

Amostras de soro ou líquido de cultura celular: remoção de impurezas por centrifugação e remoção em tubos EP, conservação (49 ° C pode ser conservado por 15-20 dias, -70 ° C pode ser conservado a longo prazo, para evitar o congelamento repetido)

4) Transporte da amostra:

① amostras de tecido, amostras de células para o transporte de gelo seco;

② amostras de células também podem ser enviadas diretamente garrafas de cultura (selagem garante não poluição, líquido de cultura não vaza);

Sero ou líquido de soro superior é enviado diretamente com sacos de gelo (a distância de envio de visão pode ser alcançada em quase 2 ou 3 dias).

Informações do cliente:

Sistema de detecção contendo referência positiva ou intraginseng, extração contendo proteína citação

Observações experimentais:

Ao preparar a poliacrilamida, deve prestar atenção à exclusão de bolhas.

A atividade do espectro gelatinoso é afetada por fatores como íons de cálcio, íons de zinco e valor de pH, por isso a formulação do tampão deve ser estritamente precisa, tentando usar água ultrapura e a temperatura de incubação também é bem dominada.

3. Use um pente grande

O pH do líquido de incubação é de 7,5-7,6, o TRITON múltiplo terá flocos por um longo tempo, então tente usar configurações frescas no experimento.

A incubação de 37 graus não deve ser feita em uma incubadora de CO2, porque o valor de pH do líquido de incubação pode ser alterado em uma incubadora normal.

A gelatina deve ser conservada em 4 graus e usada dentro de uma semana após a preparação.

Experimento em serviço: