Analisador de DSF de alto fluxo, analisador de DSF de alto fluxo (fluorescência de varredura diferencial) é um instrumento avançado, amplamente utilizado em pesquisas biofarmacêuticas, análise de estabilidade de proteínas e outras áreas. Ele pode monitorar as mudanças na configuração da proteína durante o aquecimento através de corantes fluorescentes ou sinais fluorescentes endógenos de proteínas, calculando a temperatura de fusão Tm (a temperatura quando a proteína dobrada é igual à proteína desdobrada).
Analisador de DSF de alto fluxo, analisador de DSF de alto fluxo (fluorescência de varredura diferencial) é um instrumento avançado, amplamente utilizado em pesquisas biofarmacêuticas, análise de estabilidade de proteínas e outras áreas. Aqui está uma descrição detalhada:
I. Princípios básicos
A DSF (Fluorimetria de Varredura Diferencial) é um método para avaliar a estabilidade térmica de uma proteína ao aquecer lentamente uma amostra em um PCR quantitativo fluorescente para detectar a quantidade de corantes fluorescentes que se ligam a proteínas com alterações estruturais durante o aquecimento. Ele pode monitorar as mudanças na configuração da proteína durante o aquecimento através de corantes fluorescentes ou sinais fluorescentes endógenos de proteínas, calculando a temperatura de fusão Tm (a temperatura quando a proteína dobrada é igual à proteína desdobrada).
II. Características principais
Alta potência: o analisador DSF de alta potência obtém a maior quantidade de informações possível em um período extremamente curto. Por exemplo, os analisadores do modelo SUPR-DSF podem realizar análises de estabilidade e triagem de 384 amostras em 60 a 80 minutos.
Baixo custo: o uso de placas padrão de 384 buracos, sem consumíveis especiais e capilares, custa apenas cerca de 100 yuans por vez.
Ampla gama de varredura de temperatura: com uma ampla gama de varredura de temperatura de 10 ° C a 105 ° C, capaz de cobrir vários domínios estruturais de proteínas.
Alta sensibilidade: Detector CMOS de alta sensibilidade para detectar mudanças de fluorescência com precisão.
Pouca quantidade de amostra: a quantidade de amostra é de apenas 1020 μL, com uma faixa de concentração de 0,05 mg / ml e 250 mg / ml, adequada para análises de estabilidade em várias etapas.
III. Composição do instrumento
O analisador DSF de alto fluxo é composto principalmente pelas seguintes partes:
Leitor de placas: usado para carregar placas de 384 buracos para ler informações de amostras.
Fonte de luz de excitação: geralmente o comprimento de onda de excitação LED é usado, como 280nm, com potência de saída de 10mW.
Sistema de detecção: incluindo espectrômetros e sistemas de detecção para a detecção de sinais fluorescentes. Os comprimentos de onda do espectrómetro são geralmente de 310 nm a 420 nm.
Software de processamento de dados: para desenhar a curva de variação da intensidade de fluorescência com a temperatura, o valor Tm da amostra de proteína e os parâmetros associados são calculados através da equação de Boltzmann.
IV. Processo operacional
O processo operacional de um analisador DSF de alto fluxo geralmente inclui as seguintes etapas:
Preparação da amostra: depois de misturar a amostra de proteína e o corante fluorescente, adicione-a a uma placa de 384 buracos.
Configurar parâmetros: definir a taxa de aquecimento do instrumento, o intervalo de temperatura e outros parâmetros.
Iniciar a detecção: Coloque a placa de 384 buracos no instrumento para começar a detectar o sinal fluorescente.
Análise de dados: processamento e análise de dados de teste usando software de processamento de dados para obter o valor Tm da amostra de proteína e parâmetros relacionados.
V. Área de aplicação
Os analisadores DSF de alto fluxo têm uma ampla gama de aplicações em várias áreas, incluindo, mas não limitado a:
Análise de estabilidade da proteína: avalia a estabilidade da proteína em diferentes condições, como temperatura, pH, intensidade iónica, etc.
Triagem de medicamentos: Triagem rápida de medicamentos candidatos que se ligam a proteínas alvo através de técnicas de triagem de alto fluxo.
Estudo de estrutura de proteínas: Estudo de mudanças na estrutura e configuração de proteínas, fornecendo um forte apoio para pesquisas como a cristalização de proteínas.
Estudo de mecanismos de inibição de compostos de pequenas moléculas: Estudo para a triagem de inibidores de compostos de pequenas moléculas e seus mecanismos farmacológicos.
6. Manutenção e manutenção de instrumentos
Para garantir o funcionamento correto e a vida útil prolongada dos analisadores DSF de alto fluxo, é necessária manutenção e manutenção periódicas. Isso inclui a limpeza da superfície do instrumento, a verificação da fonte de luz e do estado de funcionamento do sistema de detecção, a calibração do instrumento e muito mais. Além disso, é necessário prestar atenção às condições de manuseio e armazenamento da amostra para evitar o impacto da poluição e deterioração da amostra nos resultados experimentais.
Em resumo, o analisador DSF de alto fluxo é um instrumento poderoso e fácil de operar, com amplas perspectivas de aplicação em áreas como pesquisa de biofarmacêuticos e análise de estabilidade de proteínas.