Células-tronco da medula dental humana

A empresa tem células-tronco da medula dentária humanaOutros produtos: Kit de teste de receptor de quimiofator humano CC 5 (CCR5)Kit de teste de detecção de quimiofator humano CC 2 (CCR2)Kit de teste de elisaKit de teste de receptor de quimiofator humano CC 1 (CCR1)Kit de teste de elisa

Fonte da organização: Medula Dental

Especificações: garrafa de cultura celular 5 x 105 células / T25

Introdução das células:

　　Células-tronco da medula dental humanaseparação do tecido da membrana; O tecido da medula dentária está localizado dentro da cavidade da medula dentária. A forma da cavidade medular é aproximadamente semelhante à forma do corpo dentário, a cavidade medular da coroa é maior, chamada de câmara medular, a cavidade medular da raiz do dente é menor, chamada de tubo de raiz, a ponta da raiz tem pequenos buracos, chamada de buraco de raiz. O tecido da medula dentária contém principalmente nervos, vasos sanguíneos, linfa e tecido conjuntivo, bem como células essenciais dentíferas dispostas na periferia da medula dentária, cujo papel é a essência dentífera. A medula dental apresenta diferentes alterações patológicas devido ao papel diferente dos estímulos causantes da doença e às diferenças na resistência do organismo, que podem se manifestar clinicamente como uma série de sintomas e sinais diferentes. Após uma longa duração, a congelação da medula se transforma em inflamação aguda da medula. Células-tronco mesenquimales (MSCs) derivam do tecido da camada mesoembrônica no período embrionário, com um forte potencial de auto-replicação e diferenciação multidirecional, com a capacidade de diferenciação direcionada para várias células terminais, como células de gordura, ossóforos, cartilagos e células musculares, o uso de MSCs para reparar danos na cartilagem tem uma boa perspectiva de aplicação, atualmente é capaz de separar e preparar células-tronco mesenquimales da medula óssea, gordura, membrana, ossos, músculos e outros tecidos, bem como a água vesical, cordão umbilical, sangue do cordão umbilical.

Descrição do método:

A isolação de laboratório da empresa foi preparada usando a digestão de colagenase, clonagem diluída de baixa densidade, o volume total de células é de cerca de 5 x 10. células/garrafas.

Teste de qualidade:

Os isolados de laboratório da empresa foram identificados por imunofluorescência CD90, com pureza superior a 90%, e não contêm HIV-1, HBV, HCV, brancos, bactérias, leveduras e fungos.

Informação de cultivo:

Médio de cultura: FBS, aditivos de crescimento, penicilina, estreptomicina, etc.

Frequência de troca: a cada 2-3 dias

Características de crescimento: parede

Morfologia celular: fibroblasto

Características de transmissão: 3-5 gerações

Liquido digestivo: 0,25%

Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2，5%

Como congelar as células?

Método de conservação congelada 1: o tubo de congelamento é colocado em 4 ° C por 30 a 60 minutos → (-20 ° C por 30 minutos *) → -80 ° C por 16 a 18 horas (ou durante a noite) → armazenamento a longo prazo no tanque de vaporphase de nitrogênio líquido.

Método de conservação congelada 2: o tubo de congelamento é colocado no refrigerador programável do programa definido para abaixo de 1-3 ° C a -80 ° C por minuto e colocado no tanque de nitrogênio líquido para armazenamento a longo prazo. -20 ° C não deve exceder 1 hora, para evitar que os cristais de gelo sejam grandes demais, causando a morte de células em massa, você também pode pular esta etapa para colocar diretamente no frigorífico de -80 ° C, mas a taxa de sobrevivência é um pouco menor.

Operações de cultivo:

1) Recuperação de células: descongelar rapidamente o tubo de congelamento contendo 1mL de suspensão celular em banho de água de 37 ° C, adicionando 4mL de meio de cultura para misturar uniformemente. Centrifugar em condições de 1000RPM por 4 minutos, descartar o líquido superior e soprar bem depois de adicionar 1-2mL de meio. Em seguida, todas as suspensões celulares são adicionadas a uma garrafa para a cultura durante a noite (ou a suspensão celular é adicionada a um prato de 10 cm, adicionando cerca de 8 ml de meio para a cultura durante a noite). No dia seguinte, troce o líquido e verifique a densidade celular.

2) Transmissão celular: se a densidade celular chegar a 80% -90%, a cultura de transmissão pode ser realizada.

1. Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

Adicione 1 ml de líquido digestivo (0,25% Trypsin-0,53 mM EDTA) em uma garrafa de cultura, coloque-a em uma caixa de cultura de 37 ° C para digerir por 1-2 minutos, em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e desmontar, rapidamente recuperar a mesa de operação, bater alguns toques na garrafa de cultura depois de adicionar uma pequena quantidade de meio para terminar a digestão.

3. Pressione 6-8ml / garrafa para adicionar o meio de cultura, suavemente batido e aspirado, centrífugo em condições de 1000RPM por 4 minutos, descarte o líquido superior, adicionando 1-2mL de líquido de cultura e soprando bem.

Divida a suspensão celular em proporção 1: 2 em um novo prato ou garrafa com 8 ml de meio de cultura.

3) congelamento celular: quando as células estão em bom estado de crescimento, as células podem ser congeladas. As garrafas T25 abaixo são classificadas;

Quando as células são congeladas, depois de descartar o meio de cultura, o PBS é limpo novamente e adicionado 1 ml, depois que as células são arredondadas, adicionado 1 ml de meio de cultura contendo soro para terminar a digestão, pode ser contado usando a placa de contagem de células sanguíneas.

2. 4min 1000rpm centrifugação para remover a clara superior. Adicione 1 ml de soro de células resuspendidas, de acordo com o número de células adicionar soro e DMSO, misturar suavemente, a concentração final de DMSO é de 10%, a densidade celular não inferior a 1x106 / ml, cada tubo de congelamento congelar 1 ml de suspensão celular, observe que o tubo de congelamento é bem marcado.

3. Coloque o tubo de congelamento na caixa de refrigeração do programa, coloque-o em um frigorífico de -80 graus e depois de 2 horas transfera-o para o armazenamento de irrigação de nitrogênio líquido. Registre a localização do tubo de congelamento para a próxima coleta.

Relatório experimental:

Produtos destinados apenas à pesquisa científica:

Separação e cultivo:

1, sob condições estériles, remova o tecido atrial de ratos SD de idade 1-3d e, em seguida, use PBS para limpar este bloco de tecido 2 vezes, então será de aproximadamente 1 mm3 de tamanho;

2, para o bloco de tecido adicionar 4mL de líquido digestivo enzimático (0,1% e 0,1% de colágenase tipo I), misturar 10s, colocar a digestão em condições de 37 ° C por 10min, em seguida, soprar com uma goteira para fazer uma suspensão unicelular, precipitar naturalmente e coletar a limpeza, colocar a 4 ° C após a terminação da digestão com o meio de cultura contendo 10 ° S;

3, o tecido restante adicionar 3-4mL de líquido digestivo enzimático, misturar 10s, colocar 37 ° C após a digestão 10min, de acordo com o método acima, coletar o limpo e terminar a digestão após 4 ° C, repetir esta etapa 2-3 vezes até que o tecido é digerido;

4, filtre a digestão celular com uma tela de aço inoxidável de 200 meshes, centrífuga de 1200r / min 10min, descarte a limpeza superior, as células precipitadas são misturadas com o meio de cultura que contém 10 S DMEM / F12, vacinadas em garrafas de cultura de 25 cm2, colocadas a 37 ° C, 5% de CO2 em uma caixa de cultura;

Após 1 h de adesão diferencial, aspirar o meio de cultura e continuar a cultivar em uma placa de 6 buracos de acordo com a necessidade experimental.

Identificação de imunofluorescência:

1, espera que as células do músculo atrial cresçam até 80% de fusão, descartar o meio de cultura, lavar as células com PBS de crescimento térmico 2 vezes, cada vez por 10 minutos, e, em seguida, fixar as células com poliformaldeído de 4% a temperatura ambiente por 15 minutos;

2, PBS lavar as células 2 vezes, 10 min cada vez, em seguida, em condições de 4 ° C, com 0,1% Triton X-100 permeabilidade de 15 min;

3, PBS lavar as células 2 vezes, cada vez por 10min, em seguida, em condições de temperatura ambiente, com 4% BSA para fechar as células por 30min;

Dilue a alfa-actina em proporção de 1: 100 e coloque-a no frigorífico de 4 ° C para incubar as células durante a noite;

5, PBS lavar as células 3 vezes, 10 min cada vez, diluir a resistência anti-alfa-actina na proporção de 1: 150, colocar 1h em condições de 37 ° C;

Lave com PBS 3 vezes, cada vez por 10 minutos, depois observe a imagem sob o microscópio fluorescente invertido e tire fotos.

Anticorpos de angiotensina II

Anticorpos do receptor 1 da angiotensina II

Anticorpos de angiogenina-1

Anticorpos de proteína tipo angiogenina 2

Kit de teste do receptor do fator químico humano CC 5 (CCR5) elisa teste gratuito

Kit de teste do receptor do fator químico humano CC 2 (CCR2) elisa

Kit de teste do receptor do fator quimico humano CC 1 (CCR1) elisa

Kit de teste Elisa para o fator químico humano CC 7 (CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7)

Kit de teste de quimiofator humano CC 5 (CCL5 / D17S136E / SCYA5) elisa teste gratuito

Kit de teste de IL-17A Elisa em ratos

Kit de teste de Interfena 17B (IL17B) Elisa em ratos

Kit de teste de Interfena 17C (IL17C) Elisa em ratos

Kit de teste de ELISA de Interferon 17F (IL17F) em ratos