Kit de ELISA do péptido tipo glóbico humano 1 (GLP-1)

　　Kit de ELISA do péptido tipo glóbico humano 1 (GLP-1)Manual de instruções

BS-0203-A Kit de ELISA de péptido tipo glóbico humano 1 (GLP-1) 96T

BS-0203-B Kit de ELISA de péptido tipo glóbico humano 1 (GLP-1) 48T

I. Princípio experimental

Este kit é usado para detectar os níveis de GLP-1 no soro humano, plasma ou soro superior de culturas celulares por meio da centrifugação de anticorpos duplos. As principais etapas incluem:

O pacote de anticorpos de fase sólida é: placa microporosa pré-embalada para purificar anticorpos monoclonais anti-GLP-1.

Ligação antígeno-anticorpo: A amostra de GLP-1 liga-se a anticorpos de fase sólida e adiciona um complexo de biformação marcado pela peroxidase de raiz (HRP).

Reação de coloração: adicionar a coloração TMB do substrato, após a terminação do ácido, a absorção é determinada no comprimento de onda de 450 nm, a concentração é proporcional à profundidade da coloração.

II. Composição da caixa

Componente Especificações Comentários

Placa pré-embalada com microporos 12 buracos x 8 linhas contendo anticorpos anti-GLP-1

Produto padrão 0.5ml / garrafa Pó congelado, deve ser resolvido

HRP marcação secundária 6ml proteção contra a luz

Substrato colorido (TMB) Liquido A 6ml + Liquido B 6ml Disponível agora

Terminador 6ml Ácido sulfúrico 2M

Liquido de lavagem concentrado 20ml diluído em 1:20

Amostra de líquido xishi 6ml com estabilizador

NOTA: Os componentes de diferentes marcas podem variar, veja as instruções específicas.

Tratamento de amostras

1. Tipo de amostra

Soro/plasma: EDTA ou hepatina anticoagulante, retirada por centrifuga.

Limpeza celular: centrifugar 1000 x g durante 20 minutos para remover as impurezas.

Homogenização do tecido: remoção centrífuga após a fissura.

2. Condições de conservação

Curto prazo: 2-8 ° C para conservar ≤ 48 horas.

Longo prazo: congelar a -20 ° C ou -80 ° C após a partilha para evitar o derretimento repetido.

Recomendações de diluição

Amostras regulares: Recomenda-se diluir 5-20 vezes (por exemplo, 20 μL de amostra + 180 μL de diluição).

Amostras de alta concentração: é necessário pré-experimento para determinar o múltiplo de diluição, diluir até 100.000 vezes (diluição em três etapas).

IV. Passos operacionais

Produto padrão

O produto padrão para liofilização é adicionado com 1 ml de diluição e deixado em reposição por 10 minutos após a mistura.

Dilução em série (por exemplo, 8pmol / L → 4pmol / L → 0,5 pmol / L).

Adicionando

Orifício padrão: 50 μL / orifício.

Foro da amostra: adicione primeiro 40 μL de diluição e depois 10 μL de amostra (diluição total de 5 vezes).

Buraco em branco: sem amostras e resistência.

incubação

Incubar a 37 ° C por 120 minutos e lavar a placa 3 vezes (1 minuto cada).

Cor e terminação

Incubar 100 μL de coloração TMB por poço a 37 ° C durante 15 minutos.

Adicione 50 μL de líquido terminante para terminar a reação e medir o OD durante 30 minutos.

V. Atenção

Evitar amostras: amostras hemolíticas, altamente lipídicas e com NaN3 (inibindo a atividade da HRP).

Equilíbrio do reagente: 20 minutos antes de usar o equilíbrio da temperatura ambiente, o líquido de lavagem concentrado precisa de um banho de água de 40 ° C para dissolver o cristal.

Controle de qualidade: é recomendado configurar um orifício composto, a curva padrão R² deve ser ≥ 0,95.

VI. Análise dos resultados

Curva padrão: desenhe uma equação de quatro parâmetros para a concentração em OD.

Cálculo de concentração: O valor de OD da amostra é substituído pela equação da curva e multiplicado pelo múltiplo de diluição.

Nota: Os dados acima são apenas para referência e não são dados reais, o experimento deve seguir estritamente as instruções ou consultar um professor técnico.

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