Kit de ELISA de algas vegetais-6-fosfato (T6P)

　　Kit de ELISA de algas vegetais-6-fosfato (T6P)Manual de instruções

BS-8050-A Kit de ELISA de Algas Vegetais-6-Ácido Fosforo (T6P) 96T

BS-8050-B Kit de ELISA de Algas Vegetais de Ácido 6-Fosforo (T6P) 48T

I. Princípio experimental

Este kit usa um teste de imunoassorção ligado a centrifase bicorpal (ELISA) para detectar os níveis de T6P em tecidos ou células vegetais. Anticorpos anti-T6P pré-empacotados em placas microporosas, após a ligação do T6P a anticorpos de fase sólida na amostra, são adicionados a um complexo de formação binária marcado pela peroxidase de raiz moringa (HRP). Adicionando a coloração TMB do substrato, TMB é convertido em azul sob a catálise HRP, amarelo após a terminação do ácido, a profundidade da coloração é positivamente relacionada com a concentração de T6P na amostra, a concentração de cálculo de absorção é determinada no comprimento de onda de 450 nm.

II. Composição da caixa

Componente Especificações Condições de armazenamento

Pré-embalado por placa microporosa 12 furos x 8 barras 2-8 ° C selado secado

Produto padrão pó congelado -20 ℃ pós-dissolução

Detecção de anticorpos marcados por HRP Liquido Proteção contra a luz 2-8 ℃

Substrato colorido (TMB) Liquido A + Liquido B Disponível atualmente, com proteção contra a luz

Líquido final Ácido sulfúrico 2M Temperatura ambiente

Liquido de lavagem concentrado Liquido 40 ℃ banho de água cristal dissolvido

amostra líquido xishi líquido contém estabilizante

NOTA: Os componentes de diferentes marcas podem variar, veja as instruções específicas.

Tratamento de amostras

1. Tipo de amostra

Tecido vegetal: Pese 0,1 g de tecido, adicione 1 ml de banho de gelo líquido extraído e extraa por centrifugação.

Células / bactérias: Depois de coletar a centrifugação para descartar o líquido, as células quebradas por ultra-som extraem o líquido.

2. Condições de conservação

Curto prazo: 2-8 ° C para conservar ≤ 48 horas.

Longo prazo: congelar a -20 ° C após a partilha para evitar o derretimento repetido.

Recomendações de diluição

Amostras regulares: Recomenda-se diluir 5-20 vezes (por exemplo, 20 μL de amostra + 180 μL de diluição).

Amostras de alta concentração: é necessário pré-experimento para determinar o múltiplo de diluição, diluir até 100.000 vezes (diluição em três etapas).

IV. Passos operacionais

Produto padrão

O produto padrão para liofilização é adicionado com 1 ml de diluição e deixado em reposição por 10 minutos após a mistura.

Dilução em série (por exemplo, 8pmol / L → 4pmol / L → 0,5 pmol / L).

Adicionando

Orifício padrão: 50 μL / orifício.

Foro da amostra: adicione primeiro 40 μL de diluição e depois 10 μL de amostra (diluição total de 5 vezes).

Buraco em branco: sem amostras e resistência.

incubação

Incubar a 37 ° C por 120 minutos e lavar a placa 3 vezes (1 minuto cada).

Cor e terminação

Incubar 100 μL de coloração TMB por poço a 37 ° C durante 15 minutos.

Adicione 50 μL de líquido terminante para terminar a reação e medir o OD durante 30 minutos.

V. Atenção

Evitar amostras: amostras que contêm nitrogênio de sódio (NaN3) empilhado (inibe a atividade da HRP).

Equilíbrio do reagente: 20 minutos antes de usar o equilíbrio da temperatura ambiente, o líquido de lavagem concentrado precisa de um banho de água de 40 ° C para dissolver o cristal.

Controle de qualidade: é recomendado configurar um orifício composto, a curva padrão R² deve ser ≥ 0,95.

VI. Análise dos resultados

Curva padrão: desenhe uma equação de quatro parâmetros para a concentração em OD.

Cálculo de concentração: O valor de OD da amostra é substituído pela equação da curva e multiplicado pelo múltiplo de diluição.

Nota: Os dados acima são apenas para referência e não são dados reais, o experimento deve seguir estritamente as instruções ou consultar um professor técnico.

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